浅析葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓致痛因子表达的影响.pdf

本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载

浅析葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大

鼠脊髓致痛因子表达的影响

本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，

请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事

如意！

新疆是世界范围内发生间斑寇蛛(俗称“黑寡妇”)

咬伤人畜最多、程度最严重的地区之一。被间斑寇蛛

咬伤患者均有剧烈腹部乃至全身疼痛，临床观察发现

给患者静脉注射葡萄糖酸钙制剂能有效缓解疼痛。有

研究表明，间斑寇蛛毒液可能参与激活Ca2+相关的

离子通道，而这种离子通道的变化引起动作电位改变，

激活感受器，将痛觉产生的传入冲动经脊髓背角整合

传递到大脑高级中枢加工后，最终产生痛觉。因此，

对致痛因子依赖于钙离子的钾离子通道蛋白

(IK1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、环氧合

酶-2(COX-2)、嘌呤能受体(P2X3)的研究至关重要。

目前，间斑寇蛛毒液对致痛因子IK1、CGRP、COX-2、

P2X3表达量的影响及葡萄糖酸钙缓解疼痛的机制尚

未见报道。本研究在间斑寇蛛毒致大鼠疼痛模型的建

立及葡萄糖酸钙对其作用研究的基础上，从组织学、

蛋白及分子水平观察间斑寇蛛毒液对大鼠脊髓中致痛

因子CGRP、COX-2、P2X3和IK1表达量的影响，

本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载

本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载

探讨葡萄糖酸钙缓解间斑寇蛛毒致痛作用的机制。

1对象与方法

1.1间斑寇蛛粗毒液的准备及成分分析采集间

斑寇蛛后，利用活体取毒囊采毒法取毒。本课题组将

所提取的新疆间斑寇蛛粗毒液送至湖南师范大学生命

科学学院生物教研室，进行理化和生物学性质的分析。

定量测定结果表明，粗毒的蛋白质含量为%，对小鼠

和蜚蠊的LD50分别为mg/kg和μg/g。

1.2实验动物及分组80只雄性SD大鼠，均购

自新疆医科大学实验动物中心。体质量160～210g，

SPF级，饲料经过Co60照射，水经过灭菌处理，大

鼠在安静环境中饲养1d后，按体重分层随机抽样分

为福尔马林致痛组、10、40、100、300μL/kg毒液致

痛组(A1、B1、C1、D1和E1组)和A2、B2、C2、

D2治疗组，治疗组大鼠均采用尾部静脉注射的方式缓

慢注射10%葡萄糖酸钙制剂2mL，注射结束后，治

疗组与致痛组每只大鼠均于右足底皮下注射5%福尔

马林溶液150μL和间斑寇蛛毒液10、40、100、300

μL/kg，各剂量组各8只大鼠。

1.3免疫组织化学法实验大鼠注射间斑寇蛛毒

素24h后断颈处死，取脊髓L4～5标本，中性福

尔马林固定，并进行脱水、包埋、切片等步骤，按照

本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载

本文为网络收集精选范文、公文、论文、和其他应用文档，如需本文，请下载

最佳稀释比例分别稀释兔抗P2X3多克隆抗体(1∶

500)、兔抗CGRP单克隆抗体(1∶50)、小鼠

抗COX2单克隆抗体(1∶200)、小鼠抗IK1单克

隆抗体(1∶50)(美国ABCAM和美国santacruz

公司提供)，上样量均为50μL，按SP法免疫组化试

剂盒操作步骤进行染色操作(北京中衫金桥生物有限

公司)，脊髓后角神经元中棕色颗粒为染色阳性，400

倍视野选择P