植物工厂化育苗教学课件 7继代培养.pptxVIP

继代培养——植物工厂化育苗

继代培养

（一）继代培养继代培养是继初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程。目的：繁殖出相当数量的无根苗，最后能达到边繁边生根的目的。继代培养的后代是按几何级数增加的过程。

继代培养中扩繁的方法：①切割茎段：常用于有伸长的茎梢、茎节较明显的培养物。这种方法简便易行，能保持母种特性。②分离芽丛：适于由愈伤组织生出的芽丛。③分离胚状体：胚状体是愈伤组织在一定的培养条件下诱导形成的，类似胚的结构，具有胚芽和胚根，在合适的条件下可发育成为新的植株。④分离原球茎。

继代培养增殖方式1、定芽（包括顶芽，腋芽）发生型：选取具有顶芽和腋芽的短枝无菌培养，诱导芽萌发成苗或增殖产生许多不定芽发育成苗，将新萌生的枝条再转接继代，重复芽到苗的增殖过程，最后使其生根形成植株的方式。将茎尖或者带有腋芽侧芽的茎段在培养基中进行诱导，使定芽，腋芽不断萌发，生长再生芽，再生成茎段最后形成丛生芽丛生茎段然后将丛生芽再进行分割，继续接种在继代培养基中，以此形式达到增殖效果。2、不定芽发生型：除了叶腋和顶芽以外，从植物体上任何部位或组织产生的芽都称之为不定芽。植物许多器官都可以作为诱导不定芽产生的外植体，比如茎段，叶，叶柄花瓣等。繁殖方式与定芽发生型一样不断萌发生长，最后形成丛生无根植株，继续分割继代培养增殖，或者生根繁殖。与定芽发生型的区别就是新的幼苗植株产生的位置不同，上面产生在顶芽侧芽，这个产生的位置在其他部位。

3、通过愈伤组织发生：诱导器官外植体产生愈伤组织，经分化培养形成芽、根再生成植株的方式。离体组培过程中植物材料通过激素诱导，已分化的组织经过脱分化,产生无序的分生状态的组织细胞团(愈伤组织)再经过培养再分化形成不同器官最后形成完整植株。

胚状体发生型：指植物器官、组织和细胞外植体经培养脱分化形成胚状体再成苗的方式。胚状体是组培苗的体细胞经过激素诱导脱分化形成的，胚状体与种子胚发育过程相似，通过球形、心形，子叶形的胚胎发育期，最后形成完整的小植株。胚状体可以从愈伤组织表面形成或者悬浮培养的细胞上得到。胚状体发育出的再生小植株与其他增殖方式发育出的小植株有两个显著不同的差异，一个是定芽，不定芽苗发育要先经过器官发生，在芽处发生单极性的枝条或无根苗，然后经过一个或一个以上培养阶段进行生根形成完整植物。胚状体发育型特点：有明显的根端及茎段，具两极分化。而定芽不定芽是单极性的只是向上长枝条无根苗发育成的小植株。与周围愈伤组织或母体组织没有结构上的联系，小植株是独立形成的。易于与其它部分分离，不需要诱导生根阶段。定芽不定芽发育型由分生细胞团形成单极性生长点，发育成芽，随后转移到诱导生根培养基中进行生根培养成为完整植株。

原球茎途径：即外植体经培养产生原球茎，再直接长成植株。原球茎是兰花种子发芽过程中的一种形态学结构，种子萌发初期不像其他植物出现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮一断破裂，胀大的胚成圆锥形称为原球茎。他是兰科植物特有的一种再生方式。兰花组培中，常从茎尖或侧芽培养中产生原球茎，他本身增殖，一个芽周围能产生几个很多个原球茎，培养一段时间后，原球茎转绿，这时可长出毛状假根，可转移培养生根，形成完整植株。如果是扩大繁殖，应该在转绿之前将其切割成小块或给予针刺等损伤，转移到新鲜增殖培养基上，可以增殖很多原球茎可以想增殖多少就繁殖多少。兰花最初每个茎尖或侧芽大约2个月左右产生3-5个原球茎，然后每个再切成4-6块，每一块在1个月内可产生3-5个原球茎。

培养基与培养条件选择1、选择培养基或条件时首先查找文献，参考近缘品种的培养基配方成分及培养条件的要求。2、在此基础上可用单因子试验或多因子试验。

比如ms﹢NAA0.1-0.2﹢BA1-3第一组：1-1ms﹢NAA0.1-0.2﹢BA11-2ms﹢NAA0.1-0.2﹢BA21-3ms﹢NAA0.1-0.2﹢BA3第二组2-1ms﹢BA1﹢NAA0.052-2ms﹢BA1﹢NAA0.1

6-BAmg/L）00.52.5510NAA012345(mg/L)0.567