要点精读-任务实施与操作记录.docxVIP

人干扰素α2b发酵液的处理

任务实施

（一）生产前准备

1.确认与填写检查记录

确认是否有前批清场合格证副本，确认生产环境、卫生和设备器具是否符合要求。填写发酵液中菌体的处理产前检查记录。

2.领料与溶液配制

领取生产用试剂耗材物料并配制溶液，主要有：

（1）破菌缓冲溶液。pH为8.0的20mmol/LTris-HCl缓冲溶液，含2mmol/LMgSO4，0.05%溶菌酶，0.01%核酸酶。

（2）洗涤液Ⅰ（1L）。pH为7.5的2mol/LTris-HCl缓冲溶液10mL，EDTA-Na21.0g，尿素120g，TritonX-1008mL。

（3）洗涤液Ⅱ（1L）。pH为7.5的2mol/LTris-HCl缓冲溶液10mL。

（二）初步溶菌

1.量取菌体

取新制菌体或冻存菌体（将冻存待破碎菌体置于室温，待稍融化后使用），称取所需菌体量，将其置于破菌缓冲溶液。破菌缓冲液与菌体湿重的用量比为10∶1，即1g湿菌体用10mL的破菌缓冲液。

2.溶解菌体

取悬浮有菌体的破菌缓冲溶液，用电动搅拌器搅拌，至溶液中出现大量核酸时，按比例加入1mol/L硫酸镁至终浓度2mmol/L，加DNA酶至终浓度0.01%（W/V），继续搅拌16～24h。

（三）菌体的破碎

1.上料

将溶解菌体后料液定量置于高压均质机料斗内，每次装量3L左右，同时将冰块置