流式培训封闭抗体.ppt

关于流式培训封闭抗体主要内容一、流式细胞仪简介二、人类白细胞抗原（HLA-B27）中的临床应用三、封闭抗体检测在临床中的应用第2页,共24页，星期六，2024年，5月流式细胞术流动细胞测量术FlowCytometry(FCM)Fluorescence-activatedcell-sorting(FACS)第3页,共24页，星期六，2024年，5月流式细胞术第4页,共24页，星期六，2024年，5月流式细胞术快速检测流动的单细胞或颗粒，达上万个/每秒检测物可以是细胞、细菌或各种微粒，0.5-50mm范围内多参数同时分析，FS/SS/FLs(荧光)可分析，可分选特点特点：第5页,共24页，星期六，2024年，5月人类白细胞抗原系统（HumanLeucocyteAntigen,HLA），俗称为白细胞血型，是人类的组织相容性抗原，HLA抗原受控于HLA基因。HLA基因是由一组高度多态性基因组成的染色体区域，因其产物代表移植供者与受者相互接受的程度，故又称其产物为移植抗原或组织相容性抗原。一、HLA简介第6页,共24页，星期六，2024年，5月HLA基因遗传区域位于人类第六号染色体短臂，区域内包含224个基因座位,已发现的等位基因数共1288种。根据编码分子的特性不同，可将整个复合体的基因分成：I类、II类、III类。第7页,共24页，星期六，2024年，5月I类基因：区位于着丝点的远端，主要包括HLA-A、B、C三个位点，各位点有数目不同的等位基因，HLA-B27是B位点的一个等位基因。II类基因区：位于着丝点的近端，主要由DR、DQ、DP三个亚区构成，每个亚区又分若干个位点。在B细胞和上表达，这两类抗原都与移植有关III类基因区：含有编码补体成分C2、C4、B因子及TNF、热休克蛋白和21羟化酶的基因，其产物是一些可溶性蛋白质。第8页,共24页，星期六，2024年，5月一、HLA-B27HLA-B27抗原属于HLA-Ⅰ类抗原，由α和β两条肽链组成。第6号染色体的HLA-Ⅰ类基因编码α链，15号染色体编码β链。基本上表达在机体所有有核细胞上，尤其是淋巴细胞表面含量丰富。目前，在HLA与疾病的关联研究中，较有临床应用价值的当数HLA-B27与强直性脊柱炎的关联。在诊断和鉴别强直性脊柱炎中有重要的应用价值。第9页,共24页，星期六，2024年，5月二、HLA-B27检测方法1.HLA-B27抗原检测CDC:微量淋巴细胞毒法FCM:流式细胞学法2.HLA-B27基因学检测荧光定量PCR第10页,共24页，星期六，2024年，5月（一）微量淋巴细胞毒法1.原理：待检的淋巴细胞表面的HLA-B27抗原与已知的HLA-B27抗体结合，在补体的参入下，导致细胞膜溶解，能透过染料使细胞着色，在显微镜下判断HLA-B27为阳性，不着色为阴性。2.方法学应用评价：该方法结果稳定，可靠，不需要特殊仪器，是目前通用的方法，一般实验室均可开展。第11页,共24页，星期六，2024年，5月第12页,共24页，星期六，2024年，5月（二）流式细胞学法1.原理：利用荧光标记的抗B27的单抗与淋巴细胞表面B27抗原结合，使细胞带有荧光强度，用流式细胞仪检测，判断B27抗原阳性或阴性。2.方法学应用评价：优点：无须分离淋巴细胞，操作简便、快速、标本用量少，自动化程度高，特异性高，稳定性好，重复性高，结果判断准确，减少了人为因素的影响，为目前较为理想的方法。缺点:是仪器昂贵，目前只在较大医院应用。第13页,共24页，星期六，2024年，5月（三）荧光定量PCR1.实验原理：在PCR反应体系中，加入荧光染料，特异地掺入DNA双链后发射荧光信号，而不掺入荧光染料的DNA分子不会发射任何荧光信号，通过检测荧光信号的强度，达到检测PCR产物扩增的目的。2.优点：基因水平的检测，直接对HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。缺点：需要特定的实验仪器及严格的实验条件和熟练操作技术，在临床上普遍开展此项检查有一定的难处。第14页,共24页，星期六，2024年，5月四、HLA-B27检测与强直性脊柱炎应用评价

1.普通人群中HLA-B27阳性率有种族与地区差异：不同作者报道不尽一致，白种人4%-13%，黑种人2%左右，日本人0.2%，中国人2%-19%。2.B27与AS强相关联，中国人AS患者HLA-B27阳性率65-100%。绝大多数B27阳性者并未患AS，所以，B27检测不可以作为AS的筛查指标。3.HLA-B27表达已成