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内蒙古绒山羊精液低温保存技术规程
1范围
本文件规定了内蒙古绒山羊精液低温保存过程中的精液采集、精液处理、精液保存和贮存、运输等内容。
本文件适用于内蒙古绒山羊精液低温保存。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB20557山羊冷冻精液
NY/T1234牛冷冻精液生产技术规程
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
精子活力spermmotility
精液中直线前进运动的精子数占总精子数的百分比。
3.2
精液低温保存semencoldstorage
将稀释好的精液保存于0℃~5℃的环境中。
4采精用品清洗和消毒
方法参照按照NY/T1234执行。
5稀释液配制
稀释液配方见附录A。
6采精
6.1采精准备
6.1.1场地
2
采精场地要保持平整、清洁、安静、遮光、无异味并进行定期消毒。室温控制在15℃~20℃。
6.1.2台羊
选择健康的发情母羊做台羊，并用保定架进行保定。
6.1.3假阴道
按照GB20557执行。
6.2采精
按照GB20557执行。
7精液处理
7.1颜色
观察集精试管中精液的颜色，正常的精液颜色为乳白色或浅黄色。
7.2密度测定
用密度测定仪检测精液的密度，并记录。精子密度高于10亿个/mL可用于后续稀释保存操作。
7.3活力测定
活力不小于70%可用于稀释保存操作，活力检测方法按照GB20557执行。
7.4精液稀释
采精1h前，将稀释液放入37℃的水浴锅中预热。采精后，将密度、活力均合格的精液使用稀释液按体积比先进行1:2等温稀释，随后将稀释完的精液按1:5进行二次稀释，使最终的精液：稀释液为1:10。
8精液保存
8.1分装
将稀释好的精液分装于15mL的离心管中，每管分装2mL～3mL，拧紧旋盖，在离心管上标记品种、羊号、生产日期或批号。
8.2降温处理
将分装了精液的离心管放置在加有500ml水、37℃的水浴烧杯中，然后放入0℃~5℃冰箱中缓慢降温，并保存。
8.3保存精液的活力检测
保存期间每隔24h在0℃~5℃环境中轻摇稀释精液，并检测精子活力。用移液枪小心吸取混匀后的精液50μL，并放入1.5mL离心管内，置于37℃的水浴锅中回温2min，按照GB20557进行活力检测。活力低于60%则不能用于输精。
3
9贮存、运输
在精液贮存、运输过程中，一定确保温度维持在在0℃~5℃,避免在运输过程中的振动。
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附录A
（资料性）
稀释液配方
A.1配制低温保存稀释预备液
Tris18g，葡萄糖5g，柠檬酸10g，果糖7.5g，NaHCO30.65g，HEPES0.6g，ATP4g溶于300mL超纯水，搅拌20min，再加入超纯水定容至500mL。然后用0.22?的过滤器过滤，在0℃~5℃条件下可保存3个月。
A.2配制低温保存稀释液
取低温保存稀释预备液90mL，添加10mL鸡蛋卵黄液，青霉素5000IU,链霉素10000mg，用搅拌器搅拌15min，5℃条件下静置12h，再2800g、10min离心。然后用0.45?的过滤器过滤上清液，在在0℃~5℃条件下可保存2周。
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