电化学传感器的构成课件.ppt

影响生物分子在载体上吸附程度的因素:1.pH：影响载体和生物分子电荷,从而影响吸附。2.离子强度：多方面的影响，一般认为盐阻止吸附。3.生物分子浓度：若吸附剂的量固定，随生物分子浓度增加，吸附量也增加，直至饱和。4.温度：生物蛋白往往是随温度上升而减少吸附。5.吸附速度：生物蛋白在固体载体上的吸附速度要比小分子慢得多。6.载体：对于非多孔性载体，则颗粒越小吸附力越强。多孔性载体，要考虑吸附对象的大小和总吸附面积的大小。53吸附法的优缺点吸附法的优点：操作简单，条件温和，可供选择的载体类型多，吸附过程可同时达到纯化和固化的目的，所得到的固定化生物蛋白使用失活后可以重新活化和再生。吸附法的缺点：生物分子与载体的结合力不强，易脱落，会导致催化活力的丧失和沾污反应产物。所得到的传感器稳定性、重现性差，灵敏度低、使用寿命短。54（2）包埋法将载体（聚合物等）与生物分子溶液混合，借助物理作用，生物分子被包埋在载体中以达到固定化。包埋法操作简单，由于生物分子只被包埋，未发生化学反应，可得高活力的固定化生物蛋白。对大多数生物分子甚至完整的微生物细胞都适用。55包埋法包括凝胶包埋法和微囊化包埋法：凝胶包埋法（胶格包埋法）：将生物分子包埋在高聚物网格内的包埋方法。聚丙烯酰胺包埋法：丙烯酰胺单体、交联剂和蛋白混合，然后加入催化剂使之开始聚合，结果就在生物分子周围形成交联的高聚物网络。海藻酸钠也可以用来作为包埋载体，它从海藻中提取出来，可被多价离子Ca2+、Al3+凝胶化。K-角叉莱胶（卡拉胶）冷却成胶或与二、三价金属离子成胶。包埋条件温和无毒性，机械强度好。固定化的蛋白回收率和稳定性都比聚丙烯酰胺法好。明胶、壳聚糖等也是常用的包埋载体。56微囊化包埋法：将生物分子包埋于具有半透性聚合物膜的微囊内。它使蛋白存在于类似细胞内的环境中，从而增加了生物分子的稳定性。?界面沉淀法是一种简单的物理微囊化法，它是利用某些高聚物在水相和有机相的界面上溶解度较低而形成的皮膜将蛋白包埋。?界面聚合法是用化学手段制备微囊的方法。他所得的微囊外观好，但不稳定，有些生物分子还会因在包埋过程中发生化学反应而失活。?表面活性剂乳化液膜包埋法是在水溶液中添加表面活性剂使之乳化形成液膜达到包埋目的的一种方法。57包埋法的优缺点包埋法的优点：是一种反应条件温和、很少改变生物蛋白结构但是又较牢固的固定化方法。包埋法的缺点：只有小分子底物和产物可以通过高聚物网架扩散，对那些底物和产物是大分子的生物蛋白并不适合。这是由于高聚物网架会对大分子物质产生扩散阻力导致固定化生物分子动力学行为改变，使活力降低。58（3）共价结合（偶联）法生物蛋白分子上的功能基团和固相支持物表面上的反应基团之间形成共价键，因而将生物分子固定在支持物上（借助共价键将生物蛋白的非活性侧链基团和载体的功能基团进行偶联）。59共价偶联法操作原则：（a）载体的物化性质要求载体亲水，并且有一定的机械强度和稳定性，同时具备在温和条件下与生物分子结合的功能基团。（b）偶联反应的反应条件必须在温和pH、中等离子强度和低温的缓冲溶液中。（c）所选择的偶联反应要尽量考虑到对蛋白的其它功能基团副反应尽可能少。（d）要考虑到蛋白固定化后的构型，尽量减少载体的空间位阻对蛋白活力的影响。60生物蛋白可提供的与载体连接的功能基团：①蛋白N—端的氨基；②蛋白C-端的羧基以及Asp残基的α-羧基和Glu残基γ-羧基；③Cys残基的巯基；④Ser、Tyr、Thr残基的羟基；⑤Phe和Tyr残基的苯环；⑥His残基的咪唑基；⑦Trp残基的吲哚基。在实际中偶联最普遍的基团是：氨基、羧基、苯环。被偶联的基团还应是生物分子活性的非必需基团，否则将导致生物蛋白失活。61共价偶联法载体的选择的一般要求:①一般亲水载体在