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好学近乎知，力行近乎仁，知耻近乎勇。——《中庸》
蛋白质含量测定方法介绍
Bradford方法1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法
(Bradford法)，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白
质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应
用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
一、原理：考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，
使染料的最大吸收峰的位置(lmax)，由465nm变为595nm，溶液的
颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱
性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合，在595nm下测
定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。Bradford法的突出优点
是:(1)灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可
达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质
-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比
Lowry法要大的多。(2)测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个
样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大
约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分
钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那
样费时和严格地控制时间。(3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、
Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA
等均不干扰此测定法。此法的缺点是:(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和
芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有
较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用球蛋白为标准蛋白质，以减
少这方面的偏差。(2)仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质
有:去污剂、TritonX-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH。
(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样)。(3)标准曲线也有轻微的非线性，
因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质
的浓度。
好学近乎知，力行近乎仁，知耻近乎勇。——《中庸》
二、试剂与器材1.试剂:(1)标准蛋白质溶液，用球蛋白或牛血清清
蛋白(BSA)，配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。(2)
考马斯亮兰G-250染料试剂:称100mg考马斯亮兰G-250，溶于50ml
95%的乙醇后，再加入120ml85%的磷酸，用水稀释至1升。2.器
材:(1)可见光分光光度计(2)旋涡混合器(3)试管16支
三、操作方法1.标准方法(1)取16支试管，1支作空白，3支留作
未知样品，其余试管分为两组按表中顺序，分别加入样品、水和试剂，
即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入:0、0.01、0.02、
0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用无离子水补充到0.1ml。最后各试
管中分别加入5.0ml考马斯亮兰G-250
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