网站大量收购闲置独家精品文档,联系QQ:2885784924

肝脏中转氨酶活力的测定.pdfVIP

  1. 1、本文档共4页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  5. 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  6. 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  7. 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  8. 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多

实验九肝脏中转氨酶活力的测定

一、实验目的

1.了解转氨酶的性质和临床意义;

2.掌握谷丙转氨酶活力的测定方法

二、实验原理

本实验以丙氨酸的氧化脱氨基为例,分别测定谷丙转氨酶,谷氨酸脱氢酶活性外,又通过抑

制剂观察肝组织中的联合脱氨基作用。在谷丙转氨酶的催化下,丙氨酸和α-酮戊二酸作用生成丙

酮酸和谷氨酸。次反应可逆,平衡点近于1.0无论正向反应或逆向反应皆可用于测定此酶的活性,

既可测定所产生的氨基酸,也可以测定生成的酮酸,因此可有多种测定方法。

本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸作为谷丙转氨酶作用的底物,利用内源性磷酸吡哆醛作为辅

酶,在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。丙酮酸能与2,4-二硝基

苯肼结合,生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙,后者在碱性溶液中呈现棕色,其吸收峰为439-530nm,

可用于测定丙酮酸的含量。

α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼结合,生成相应的苯腙,但后者在碱性溶液中吸收光谱与

丙酮酸二硝基苯腙有差别,在520nm波长比色时,α-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二

硝基苯腙为低(约相差3倍)。经转氨基作用后,α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加,因此在波长为520nm

处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸和α-酮戊二酸的摩尔浓度呈线性关系,故可借此测定谷

丙转氨酶的活力。

三、实验材料、试剂和仪器

(一)材料与试剂

猪肝脏、乙醇、0.4mol/LNaOH

标准丙酮酸溶液(1mL相当于500μg):准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg,溶于100mL的

0.05mol/L的H2SO4中,此液需临用前配制。

谷丙转氨酶底物:称取L-丙氨酸0.90g及α-酮戊二酸29.2mg,先溶于pH7.4的0.1mol/L磷酸

缓冲液中,然后用1mol/LNaOH调至pH7.4,再加pH7.4的0.1mol/L磷酸缓冲稀释至100mL,贮

藏于冰箱内,可保存一周。(试验了一下pH接近7.5,中间未调整pH值)

0.1mol/L的磷酸缓冲液(pH7.4):称取13.97gK2HPO4(如果是K2HPO4·∙H2O,则需称取

18.31g)和2.69gKH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。

0.02%2,4-二硝基苯肼溶液:称取2,4-二硝基苯肼20mg溶于少量1mol/L盐酸中,加热溶解后,

利用1mol/L盐酸稀释至100mL。

(二)仪器/器具

电子天平、分光光度计、剪刀、移液管、组织破碎机

四、实验步骤

1.肝匀浆制备与稀释

将猪肝用生理盐水冲洗,滤纸吸干,称取肝脏0.5g,剪成小块,置于烧杯内,加入4.5mL预

冷的pH7.4的0.1mol/L磷酸缓冲液,制成10%肝匀浆,冰冻保存备用。吸取上述肝匀浆1mL,加

入预冷的pH7.4的0.1mol/L磷酸缓冲液49mL(即稀释50倍)摇匀,作为实验中使用的稀释肝匀

浆(室温中放置时间过久,会引起酶活性下降或失活因此需现用现配制,且放置时间不宜过久)。

2.谷丙转氨酶活力的测定

(1)取试管4支,分别标“测定管A”、“对照管B”、“标准管S”,“空白管”按下表进行操作。

测定管A标准管S对照管B空白管O

谷丙转氨酶底物/mL0.50.500

37℃保温5min

稀释肝匀浆/mL0.1标准丙酮酸0.10.1HO0.1

2

混匀后,37℃水浴准确保温30min

0

文档评论(0)

177****3106 + 关注
实名认证
文档贡献者

大学本科生

1亿VIP精品文档

相关文档