六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A含量的高效液相色谱法测定 .pdf

DOC格式论文，方便您的复制修改删减

六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A含量的

高效液相色谱法测定

（作者:___________单位:___________邮编:___________）

【摘要】目的建立六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A的高效

液相色谱(HPLC)法含量测定方法。方法采用高效液相色谱法;色谱柱：

Kromasil100-5C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，检测器：蒸

发光散射检测器(ELSD);柱温：室温;流动相：乙腈-水(75∶25);流速：

0.8ml·min-1，ELSD气流速度：2.00L·min-1漂移管温度：82℃。

结果被测定峰与其他组分可达到基线分离，24-乙酰泽泻醇A的线性

范围为0.288～2.304μg(r=0.9998)，平均回收率为100.04%(RSD

为1.05%，n=9)。结论该方法操作简便准确，重现性好，能有效控制

六味地黄丸的质量。

【关键词】六味地黄丸;24-乙酰泽泻醇A;高效液相色谱法

六味地黄丸收载于《中国药典》2005年版，由熟地黄、山茱萸(制)、

牡丹皮、山药、茯苓、泽泻6味药物组成，原标准含量测定项中仅有

丹皮酚和熊果酸的含量测定[1]，并无24-乙酰泽泻醇A含量测定方

法。众所周知，泽泻醇具有利尿、降血脂、抗脂肪肝及保肝作用，为

泽泻的主要活性成分。但是通过文献检索，未发现有关六味地黄方中

DOC格式论文，方便您的复制修改删减

24-乙酰泽泻醇A含量测定研究报道的文献。本实验采用高效液相色

谱法测定六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A的含量，本法操作简单，专

属性强，稳定可靠[2～4]。

1仪器与试药

Waters2695高效液相色谱仪;蒸发光散射检测器

(ELSD);SartoriusBP211D电子天平;HU10260B型超声波清洗

器;H.H.S型电热数字显示恒温水浴锅。乙腈为色谱纯，水为超纯水，

其它试剂均为分析纯。24-乙酰泽泻醇A由南京中医药大学提供，经

HPLC峰面积归一化法测得含量达98%以上。六味地黄丸由怀化正好制

药有限公司提供。

2方法

2.1色谱条件色谱柱Kromasil100-5C18色谱柱(250mm×4.6mm，

5μm);流动相：乙腈-水(75∶25);柱温：室温;流速：0.8

ml·min-1;ELSD气流速度：2.00L·min-1，漂移管温度：82℃。

2.2对照品储备溶液的制备精密称取24-乙酰泽泻醇A对照品

适量，配制成浓度为720μg/ml的储备液，待用。

2.3供试品溶液的制备方法取本品内容物，研细，粉末过60目

筛，取约5.0g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加入石油醚

20ml，超声处理(功率200W，频率40kHz)2次,30min/次，滤过，

置水浴上蒸干，加乙腈定容至2ml,滤过,即得。

2.4阴性对照试验取按处方比例除去泽泻的其它药材适量，依

照六味地黄丸的制备工艺和供试品溶液的制备方法得到缺泽泻的空

DOC格式论文，方便您的复制修改删减

白对照溶液，作为阴性对照溶液。按照上述色谱条件进行测定，供试

品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，

而阴性对照色谱上在此保留时间无干扰。见图1。

2.5线性关系的考察精密吸取24-乙酰泽泻醇A对照品储备液分

别精密吸取对照品储备溶液1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0ml置

50ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。浓度分别14.4，28.8，

43.2，57.6μg/ml，86.4μg/ml，115.2μg/ml。分别精密吸取上

述溶液各20μl，依次注入液相色谱仪，以进样浓度为横坐标(X)，

峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。回归方程为：Y=208996X–96

391，r=0.9998。结果表明24-乙酰泽泻醇A在0.288～2.304μg

范围内线性关系良好。A-对照品B-样品C-缺泽泻的阴性对照