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志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟
SwiMR技术：新兴的抗体和蛋白高表达细胞株的筛选方式
前言
大分子生物制药市场近几年急速增长，已经突破千万亿大关。
2017年全球最畅销的10大药物中，大分子占8个，小分子只有2个，
因此大分子药物研发成为近几年各大药厂和资本追逐的重要领域。在
生物制药研发过程中，生产大分子药物的稳定细胞株的开发是整个药
物研发和生产中最重要的步骤，因此选择合适的细胞株开发的方法是
每一个生物药企需要仔细甄选的环节。
一．传统细胞株开发系统的局限性
传统的细胞株开发方法，有DHFR缺陷的CHO系统和GS-CHO
系统：
DHFR缺陷的CHO系统：以DG44细胞株为代表，这是一种二
•
氢叶酸还原酶（DHFR）缺陷型细胞，在缺乏次黄嘌呤-腺嘌呤（HT）
培养基中不能生长，当转入携带有DHFR的基因后可以生长，并且
DHFR可以被甲氨蝶呤（MTA）抑制，通过增加MTA的浓度、DHFR
基因的扩增，伴随着目的基因扩增，从而达到高表达细胞株的筛选。
•GS-CHO系统：分别以CHOK1SV为代表的谷氨酰胺合成酶存
在（低表达）的细胞和GS-KO为代表的谷氨酰胺合成酶敲除的细胞。
在CHOK1SV细胞中，在缺乏谷氨酰胺的培养基中生长缓慢，GS抑制
剂，L-氨基亚砜蛋氨酸（MethionineSulphoximineMSX），可用于
抑制内源性GS活性，只有转染了额外GS基因可以生存。因此同样可
以通过增加MSX的浓度，来增加GS基因的拷贝数同时伴随着目的基
因的拷贝数的增加，从而达到高表达细胞株的筛选。
DG44和CHOK1SV系统缺点：均是依靠基因拷贝数扩增的高表
•
达细胞株筛选方法，但加压筛选往往会带来细胞株不稳定的问题，在
去除筛选药物后，表达量可能会出现大幅的下降。高拷贝带来的高表
志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟
达经常会出现拷贝数丢失，而引起产量下降甚至丢失的问题。更有甚
者，在高选择压力情况下，会出现部分细胞株为适应高选择压力而出
现目的基因突变的问题。另外，对于DHFR系统，多轮的的加压筛选，
也带来了筛选周期过长的问题，一般需要长达6-12个月的筛选周期，
不能满足现代快速的药物开发需求。
如下图1、2分别展示了对DHFR系统、GS系统的稳定性评价的
数据[1-2]：
图1.对DHFR系统稳定性评价的数据[1]
图2.对GS系统稳定性评价的数据[2]
志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟
二．FACS是最有效的筛选方式
非加压筛选模式，即不是通过目的基因拷贝数增加来筛选高表达
细胞株的方式，必然是相对稳定的细胞株筛选方式。Lonza开发了
GS-KO系统，将谷氨酰胺合成酶的基因完全敲除，只有携带GS基因
的细胞在缺乏谷氨酰胺的培养基中生长，因此不需要MSX的加压筛选，
伴随GS基因表达的目的基因表达的细胞同时也能被筛选出来。在这种
方式中，GS基因仅作为筛选标记出现
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