高效液相色谱法测定可口可乐中咖啡因的含量-- .pdfVIP

高效液相色谱法测定可口可乐中咖啡因的含量

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前言

高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的

单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在

柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。具有分离

效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广、色谱柱可反复使用的

特点。

咖啡因（Caffeine）是日常饮料中主要成分，据查验，1g雀巢咖啡含35咖啡

[1]

因，1g茶含20-35mg，而1000ml可乐饮料中含90-100mg。咖啡因亦称咖啡碱，

是一种甲基黄嘌呤，属生物碱类物质，化学名称为l，3，7一三甲基一3，7一二

氢一1H一嘌呤一2，6一二酮水合物，化学式C。H。。N。0：，相对分子质量为194．2，

易溶于水、乙醚、氯仿、二氯甲烷，能溶于乙醇、丙酮、醋酸乙酯，难溶于乙醚

[2]

和苯，熔点为235～237℃，白色结晶粉末，无臭，味苦，有风化性。咖啡因是

从茶叶、咖啡果中提炼出来的一种生物碱，属黄嘌呤类，药理作用相似，咖啡因

的中枢兴奋作用较强，临床主要用作中枢兴奋药。适度地使用有祛除疲劳、兴奋

神经的作用，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。但是，大剂量或长期使用也

会对人体造成损害，特别是它也有成瘾性，一旦停用会出现精神萎顿、浑身困乏

疲软等各种戒断症状，被列入受国家管制的精神药品范围。化学名称1,3,7-三甲

基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人

精神兴奋。

[3][4]

常用来测定咖啡因的方法有滴定法，紫外分光光度法，高效液相色谱法

[5][6][7]

，气相色谱法，毛细管电泳法等。

1试剂、仪器和药品

仪器：KQ3200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司；

AL204电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；

Waters-2695高效液相色谱仪（美国；

试剂：甲醇为色谱纯、超纯水；

样品：可口可乐饮料(市售)；

对照品：咖啡因(原料药)；

2色谱条件

1.色谱柱：INERTSIL-ODS-SP-18(4.6×150mm，5um)；2.流动相：甲醇：水=35:65

（V/V）；3.流速：1ml/min；4.检测波长：270nm；5.柱温：25℃。

3方法与结果

3.1咖啡因对照品溶液的配制

精密称取10.10mg咖啡因，用少量的超纯水溶解，定容至10ml，得到

1.010mg/ml的对照品储备液。再精密取0.3ml的对照品储备液，定容至10ml，

得30.00μg/ml的对照品溶液。

3.2样品的准备

取30ml可口可乐饮料放入烧杯中，用超声波脱气15min，驱赶饮料中的二

氧化碳。用移液管精密移取1ml已脱气的可口可乐饮料，用水稀释至10ml，为

样品溶液，用0.22um微孔滤膜过滤，移入进样瓶。

3.3标准曲线的绘制

精密称取10.10mg咖啡因，用少量的超纯水溶解，定容至10ml，得

1.010mg/ml的标准储备液。分别取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml于10ml容量瓶中，

加水稀释至刻度，配成咖啡因浓度分别为10.00、20.00、30.00、40.00、50.00μg/ml

的标准溶液。从各容量瓶中吸取标准溶液用0.22um微孔滤膜过滤，移入进样瓶

中。取标准溶液10μl进样，按上述色谱条件测定，记录峰面积和保留时间的数

据(见表1)，绘制标准曲线(见图1)。结果表明，咖啡因浓度在10.00-50.00ug/ml

范围内，线性关系一般，线性回归方程为Y=30838X+24301，r=0.999。

表1

C1C2C3C4