基于SYBR Green实时定量PCR法在抗汉坦病毒药物评价与筛选中的应用.pdfVIP

吾日三省乎吾身。为人谋而不忠乎?与朋友交而不信乎?传不习乎?——《论语》

基于ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ实时定量ＰＣＲ法在抗汉坦病毒药物评价与筛选

中的应用

卫飞凌佳馨李宁李金林陈良君熊海蓉罗凡刘媛媛杨占秋・

【摘要】目的建立一种体内外用于精确评价与筛选抗汉坦病毒药物的方法。

方法以汉坦病毒Ｓ基因，哺乳动物和鼠甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）基因的

保守序列为靶序列，利用Ｐｒｉｍｅｒｖ３．０软件设计三对实时定量ＰＣＲ引

Ｅｘｐｒｅｓｓ

物，建立了汉坦病毒的ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ实时定量ＰＣＲ检测方法，并将其应用到抗汉

坦病毒药物的评价与筛选中。结果将汉坦病毒，哺乳动物和鼠ＧＡＰＤＨ靶基因连

接ｐＧＥＭ—Ｔ载体，构建重组质粒，经过梯度稀释后作为标准品，根据标准品稀释

度与Ｃｔ值的关系，获得扩增效率良好及可信度高的标准曲线。结论该方法可

以用于体内外评价和筛选抗汉坦病毒药物，具有现实指导意义。

【关键词】汉坦病毒；ｑＰＣＲ；抗病毒药物；评价

ｏｆＳＹＢＲＧｒｅｅｎ。’ｂａｒｅｓｅａｌｄｔｉｍｅｆｏｒ

Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｓｓａｙ

ｖｉｒｕｓｉｏｎａｎｄ

ｉ－Ｈａｎｔａａｎｅｖａｌｕａｔ

ａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓｓｃｒｅｅｎｉｎｇ

Ｆｅｉ

Ｗｅｉ，Ｊｉａ—ＸｉｎＬｉ，Ｊｉｎ—ＬＬｉｎｉ，Ｌｉａｎｇ—Ｊｕｎ

Ｌｉｎｇ，ＮｉｎｇＣｈｅｎ，Ｈａｉ—ＲｏＸｎｉｇｏｎｇ，ＦａＬｕｏｎ，

Ｙｕａｎ—Ｙｕａｎ

Ｌｉｕ，Ｚｈａｎ—Ｑｉｕ

Ｙａｎｇ＊

（ＳｔａｔｅｏｆＡｎｔｉｖｉｒａｌａｎｄＡｎｔｉｔｕｍｏｒ

ｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ

ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙＶｉｒｏｌｏｇｙ：Ｈｅｒｂａｌ

ＳｔａｔｅＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｆｏｎＴｒａｄｉｔｉｏｎＣａｌｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ＆ＩｎｓｔｉｔｕｔｏｆｅＭｅｄｉｃａｌ

ＣｅｎｔｅｒｏｆＦｏｏｄａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎ：ＭｅｄｉＳｃａｌｃｈｏｏｌＷｕｈａｎ

Ｖｉｒｏｌｏｇｙ：ＲｅｓｅａｒｃｈＤｒｕｇ

４３００７１：Ｃｈｉｎａ）

Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｗｕｈａｎ

Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｒｅａｌ—’ｔｉｍｅＰＣＲ

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ

ａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ

ａｓｓａｙ

ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉａｏｎｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｆｏｎａｎｔｉ—Ｈａｎｔａａｖｉｒｎｕｓｉ