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保健食品毒理鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验
1范围
本方法规定了Ames试验的基本技术要求。
本方法适用于评价保健食品的致突变作用。
本方法不适用于具有杀菌和/或抑菌作用的受试物，不适用于具有妨碍哺乳动物细胞复制系
统的受试物。
2原理
鼠伤寒沙门氏菌的突变型（即组氨酸缺陷型）菌株在无组氨酸的培养基上不能生长，在有组
氨酸的培养基上可以正常生长。但如在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时，则沙门氏菌
突变型可回复突变为野生型（表现型），因而在无组氨酸培养基上也能生长，故可根据菌落
形成数量，检查受试物是否为致突变物。某些致突变物需要代谢活化后才能使沙门氏菌突变
型产生回复突变，代谢活化系统可以用多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆（S-9）制备的
S-9混合液。
3仪器
3.1实验室常用设备。
3.2低温高速离心机，低温冰箱（-80℃）或液氮罐，洁净工作台，恒温培养箱，恒温水浴，
蒸气压力锅，匀浆器等。
4试剂
培养基成分或试剂除说明外至少应是化学纯，无诱变性。避免重复高温处理，选择适当保存
温度和期限，如肉汤保存于4℃不超过六个月，其它详见下述各培养基及溶液说明。
4.1营养肉汤培养基
牛肉膏2.5g
胰胨(或混合蛋白胨)5.0g
氯化钠2.5g
磷酸氢二钾（KHPO·3HO）1.3g
242
蒸馏水500mL
加热溶解，调pH至7.4，分装后0.103MPa20min灭菌，普通冰箱保存备用，保存期
不超过半年。
4.2营养肉汤琼脂培养基：用作a．基因型鉴定的结晶紫敏感试验，抗氨苄青霉素和四环素
试验，紫外线敏感性试验。b．细菌活力鉴定。
琼脂粉1.5g
营养肉汤培养基100mL
加热融化后调pH为7.4，0.103MPa20min灭菌。
4.3底层培养基所需试剂及配制方法如下：
4.3.1磷酸盐贮备液
磷酸氢钠铵（NaNHHPO4H·O）17.5g
442
柠檬酸（CHOH·O）10.0g
6872
磷酸氢二钾（K2HPO4）50.0g
硫酸镁1)（MgSO·7HO）1.0g
42
加蒸馏水至100mL，0.103MPa20min灭菌。
注：1)待其他试剂完全溶解后再将硫酸镁缓慢放入其中继续溶解，否则易析出沉淀。
4.3.240％葡萄糖溶液
葡萄糖40.0g
加蒸馏水至100mL，0.055MPa20min灭菌。
4.3.31.5％琼脂培养基
琼脂粉6.0g
加蒸馏水至400mL
融化后0.103MPa20min灭菌。
4.3.4底层培养基(无菌操作)
趁热（80℃），在灭菌琼脂培养基中（400mL）依次加入：
磷酸盐贮备液8mL
40％葡萄糖溶液20mL
φ
充分混匀，待凉至80℃左右时倒平皿，每皿（90mm）25mL，37℃培养过夜以除去水
分及检查有无污染。
4.4顶层培养基的成分及制备
4.4.1顶层琼脂
琼脂粉3.0g
氯化钠2.5g
加蒸馏水至500mL
4.4.20.5mmol／L组氨酸—生物素溶液(诱变试验用)
D-生物素（分子量244）30.5mg
L-组氨酸（分子量
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