高效液相色谱操作流程 .pdfVIP

1.开机自检

具体操作如下：

（1）打开Alliance2695和2489的电源开关至ON，仪器开始自检；

（2）仪器进行大约5分钟的自检过程，待仪器自我测试完毕后，出现画面上方的状态显示区出

现Idle，表示开机测试正常。

（3）打开Empower软件，进入系统(用户名system，密码manager)

2.流动相

（1）有机溶剂要求用色谱纯（进口名牌最好），水合缓冲盐溶液要用超纯水，每48小时制备新

鲜的水相流动相，尤其是100%含水流动相使用时间不超过两天。

（2）检查6根管子是否都在液面以下，溶剂的位置必须高于溶剂混合阀，并检查、计算溶剂的

用量，不够需及时配制、添加。洗针液的溶剂瓶应放于试验台面上，与2695仪器底部位

于同一水平面上。

（3）柱塞密封垫（SealWash）、针以及进样器选用甲醇进行清洗，所用所有溶剂或溶液均需用

0.45μm的膜过滤并超声脱气20分钟，用洁净的玻璃容器盛放，避免污染，同时玻璃容

器应用超纯水清洗而不能用自来水。

3.灌注柱塞密封清洗

清洗操作步骤：

（1）回到Menu画面，选择Diag，确定SealWash的管路放在正确的位置；

（2）按PrimeSealwash，再按Start，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，先按Halt，再

按Close

4.灌注针头清洗

操作步骤：

回到Main画面，选择Diag，按下PrimeNdlWash。设定值为30秒，若想多洗几次，按StartAgain。

5.打开真空脱气机

如液相仪管路干，可进行使用，如管路不干则按照以下步骤进行操作：按Menu/Status键，进

入Status(1)画面；利用方向键将光标移至Degasser位置，按Enter；利用上下键选择模式为ON。

注意在开启除气装置时，要确认所用溶剂管路都充满溶剂；若没有溶剂时请执行溶剂的Dry

Prime操作。

6.执行干灌注

确定流动相溶剂的管子放在正确的位置，检测器（Detector）废液管及定量环（SampleLoop）

的废液管是否放置于适当的废液容器中。

摇动溶剂瓶内的过滤器（SolventFilter），防止气泡附着在过滤器的外表面。

将空的针筒插入抽液阀（Prime/Ventvalue）中，以逆时针的方向旋转3圈。

按Menu/Status键，进入Status(1)画面，按DirectFunction功能键，选择DryPrime，按Enter。

按下欲使用的溶剂开启阀门（例如OpenA），然后将针筒向外拉，抽出5~10ml的溶剂并完全

抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭Prime/Vent阀门。

在Enteraduration中输入3分钟，按Continue键，泵即以3.0ml/min的流速进行清洗（Purge）。

可重复上两个步骤，将所要使用的流动相溶剂DryPrime。

7.执行湿灌注

操作步骤：

（1）按Menu/Status键，进入Status（1）画面，利用方向键将光标移至Composition字段，

将欲WetPrime的溶剂输入100%；按DirectFunction功能键，选择WetPrime，按Enter。

（2）WetPrime的原设定值一般为FlowRate:7.5ml/min，Tme:3min，确定按OK键，泵即开

始运行WetPrime操作。重复上述步骤直到所有的溶剂WetPrime进行完毕。

8.设定流动相平衡色谱柱

按Menu/Status键，进入Status（1）画面，利用方向光标移至Composition字段，利用仪器面

板右侧的数字键设置试验要求的溶剂组成比例，此时会在原溶剂比例表的下方出现新编辑溶剂比

例表（NewComposition）。

设定好新的溶剂组成比例后，按ChangeComp的功能键（改变溶剂的组成比例Change

Composition），此设定的溶剂组成比例即为当前的比例。

利用方向键将光标移至Flow字段，利用仪器面板右侧的数字键设定流速，此时仪器即设定的

溶剂组成比例和流速来平衡色谱柱。

特别提示：对于常规的