《微生物》实验8细菌生理生化反应实验.pptx

实验八

细菌生理生化反应实验

一、实验目的

1.巩固微生物无菌接种技术；

2.了解细菌鉴定中常用的生理生化实验的原理。

3.掌握细菌鉴定中主要生理生化反应的常规试验法。

二、实验原理

由于各种细菌具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物（如糖、醇及各种含氮物质等）不同，或利用相同的底物但产生的代谢产物却不相同，因此可利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌。

糖类发酵试验：不同的细菌分解糖、醇的能力不同。有些细菌分解某些糖产酸并产气，有的仅产酸不产气，因此可根据其利用糖能力的差异作为鉴定菌种依据之一。

在糖发酵培养基中加入溴麝香草酚蓝作为酸碱指示剂，其pH指示范围为6.0-7.6，它在碱性条件下呈蓝色，在酸性条件下变成黄色。有无气体产生，可从培养液中杜氏小管的闭口端上是否有气泡来判断。

柠檬酸盐利用试验：由于细菌不断的利用柠檬酸盐并生成碳酸盐，使培养基pH由中性变为碱性，培养基中的指示剂由浅绿色变为蓝色（溴麝香草酚蓝指示剂：pH6时为黄色，pH6-7.6为绿色，pH7.6为蓝色）

H2S产生试验：某些细菌能分解含硫氨基酸（甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸）产生H2S。H2S遇铅盐或铁盐便形成黑色PbS或Fe2S3。如产生H2S就与培养基中的柠檬酸铁铵起反应产生黑色沉淀物。

三、实验材料

1.菌种

大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌

2.培养基

糖发酵培养基（葡萄糖、蔗糖、乳糖）、西蒙斯（Simons）氏柠檬酸盐培养基、柠檬酸铁铵培养基

3.器具

恒温培养箱、高压灭菌锅、接种环、杜氏小管等

四、实验方法

1.糖类发酵试验

（1）编号：取葡萄糖、蔗糖、乳糖培养液各4支，分别注明：①大肠埃希氏菌，②产气肠杆菌，③普通变形杆菌，④空白对照。

（2）接种：用接种环挑取少量菌种于相应编号的试管中，37℃恒温培养箱培养24h或72h观察结果。

（3）观察结果：绿色无气泡，既不产酸也不产气，即阴性用“-”表示；

黄色无气泡，产酸不产气，即阳性用“+”表示；

黄色且有气泡，产酸产气，即阳性用“++”表示。

2.柠檬酸盐利用试验（citratetest）

（1）编号：取4支西蒙斯（Simons）氏柠檬酸盐培养基，分别注明①②③④。

（2）接种：按编号斜面划线接种，然后置37℃恒温箱中培养24-48h。

（3）观察：培养基变为蓝色，即为阳性用“+”表示；培养基仍为绿色则为阴性反应，用“-”表示。

3.H2S产生试验

（1）编号：取4支柠檬酸铁铵直立柱培养基，分别注明①②③④。

（2）接种：按编号用穿刺接种法接种，置37℃恒温箱中培养24-48h。

（3）观察：观察穿刺线上及试管基部是否有黑色出现，如有则为阳性，以“+”表示；如无黑色出现则表明不产生H2S，以“-”表示。

五、实验结果记录

测试项目

糖发酵实验

IMViC

H2S产生

葡萄糖

乳糖

蔗糖

citrate

①大肠埃希氏菌

②产气肠杆菌

③普通变形杆菌

④空白对照

记录结果并分析产生这种现象的原因。

六、注意事项

1.接种前必须做好标记，仔细核对菌名和培养基，以免弄错。

2.糖类发酵试验菌种接种到液体培养基中后，不要摇晃试管，以免杜氏小管内产生气泡，造成结果判定不准。

七、思考题

1.大肠埃希氏菌和产气肠杆菌分解葡萄糖所生成的产物有何不同？

2.为什么做各项生理生化反应时要有空白对照？