《微生物》全套实验教学课件.pptx

微生物实验课程要求;实验报告的撰写要求;实验一显微镜油镜的使用及

细菌的简单染色法;;实验内容;一、实验目的：;二、实验原理：;油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时，因介质折光率不同，光线将发生散射现象，使射入镜筒的光线很少，物象不清。若在油镜与玻璃片之间加入与玻璃折射率相近的香柏油，则使通过的光线不至因折射而减弱，因此能清楚地看到物象。;2、染色原理;三、实验材料;四、实验方法与步骤：;1、涂片：

在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2

整个过程中要注意无菌操作。（示范无菌操作技术）;2、干燥：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方温火烘干，切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。

3、固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。

;4、染色：将固定过的涂片加适量草酸铵结晶紫染色1-2min。

5、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。

6、干燥：涂片放在空气中晾干或用吸水纸轻轻吸干。

7、镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野

后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将

油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。

8、绘图：

;9、实验完毕后的处理：;五、实验结果记录;六、思考题;七、注意事项;;实验二细菌的革兰氏染色;实验内容;一、实验目的：;细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G－）。;细菌对于革兰氏染色的不同反应，主要是由于它们细胞壁的成分和结构不同。;G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，经乙醇处理后由于脱水作用使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞中不易脱色，因此细菌仍保留初染时的紫色。

G-菌的细胞壁肽聚糖层较薄、交联度低，而且含有较多脂类物质，故用乙醇脱色时脂类物质被溶解，细胞壁的通透性增加，使初染的结晶紫-碘的复合物渗出细胞，结果是细菌被脱色，再经沙黄复染后就成了红色。;革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌细胞壁的构造

;三、实验材料;四、实验步骤：;7、实验完毕后的处理：;五、实验结果记录;六、思考题;七、注意事项;实验三酵母菌大小和数量的测定;面包酵母;实验内容;一、实验目的：;二、实验原理：;在低倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，寻找两条完全重合的刻度线，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和小方格的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。

两重合线间镜台测微尺格数×10

目镜测微尺每格长度（μm）=

两重合线间目镜测微尺格数;2、显微直接计数法（血球计数板）;血球计数板计数网的分区和分格;如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。可拍照后从图片上计数。;三、实验材料;四、实验方法与步骤：;取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。

取酵母菌稀释液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。

静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央计数室。

在高倍镜下计数：随机计数五个中格的菌数，然后求得每个中格的平均值。乘上16(或25)就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。

5.计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。;;五、实验结果记录;总菌数的测定(利用公式计算)。T表示五个中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。;六、思考题;七、注意事项;实验三、

细菌芽孢染色法及观察;实验内容;一、实验目的：;二、实验原理：;二、实验原理：;三、实验材料;四、实验方法与步骤：;4、实验完毕后的处理：;五、实验结果记录;六、思考题;七、注意事项;实验四;一、实验目的

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