DB45T 1665-2018 药用植物繁殖体超低温保存技术指南.docxVIP

ICS65.020.20B38

DB45

广西壮族自治区地方标准

DB45/T1665—2018

药用植物繁殖体超低温保存技术指南

Techinicalguideofmedicinalplantspropagulecryopreservation

2018-01-20发布2018-02-20实施

广西壮族自治区质量技术监督局发布

I

DB45/T1665—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4基本原则 2

5基本程序 2

6材料准备 2

7冷冻前处理 3

8冷冻 3

9生活力检测 4

DB45/T1665—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由广西壮族自治区卫生和计划生育委员会提出。本标准由广西卫生标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：广西壮族自治区药用植物园。

本标准主要起草人：缪剑华、韦坤华、朱艳霞、李翠、林杨、黄燕芬、李林轩、谷筱玉、董扬。

III

1

DB45/T1665—2018

药用植物繁殖体超低温保存技术指南

1范围

本标准规定了药用植物繁殖体超低温保存技术的术语和定义、基本原则、基本程序、材料准备、冷冻前处理、冷冻和生活力检测。

本标准适用于广西境内药用植物繁殖体的超低温保存。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

GJB2253A氮气和液氮安全应用准则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

药用植物繁殖体vegetativeformofmedicinalplants

能通过有性繁殖或无性繁殖方式能繁衍产生药用植物后代的材料，包括有性繁殖体种子、孢子体、花粉等，无性繁殖体根、休眠芽、茎尖分生组织、悬浮细胞、愈伤组织、原生质体等。

3.2

超低温保存cryopreservation

在液氮液相（-196℃)或液氮雾相（-150℃)中对生物器官、组织或细胞等材料进行长期保存。在适宜条件下解冻可恢复活力，繁殖、再生出新的植株，并保持原遗传特性。

3.3

冷冻保护剂cryoprotectant

可以保护生物器官、组织或细胞等材料免受冷冻损伤的物质，常用的冷冻保护剂有二甲基亚砜、蔗糖、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、甘油、聚乙二醇等。

3.4

玻璃化法vitrification

在超低温保存过程中，利用高浓度的冷冻保护剂处理生物器官、组织或细胞，使液态材料在降温过程中逐渐变成高度粘滞状的、似玻璃状的、非晶体固体状态的方法。

2

DB45/T1665—2018

3.5

生活力viability

繁殖体潜在的繁殖能力和其所具有的生命力，即一批繁殖体中具有生命力的(即活的)繁殖体数目占总数的百分率。

4基本原则

4.1本标准为药用植物繁殖体超低温保存通用技术，具体的某一种药用植物或某一类繁殖体材料在进行超低温保存之前，都应进行试验研究，并制定出相应的操作处理程序手册。

4.2超低温保存过程中液氮的质量检验按GJB2253A的规定执行。

4.3超低温保存过程中液氮生物容器的技术要求和检验规格按GB/T5458的规定执行。

5基本程序

5.1可直接冷冻的繁殖体超低温保存时应遵循的操作流程参见图1。

5.2需包埋预处理的繁殖体超低温保存时应遵循的操作流程参见图2。

干燥法

干燥法

预培养法

预处理

预培养千燥法

玻璃化法

繁殖体放入液氮

中超低温保存冷冻

繁殖体超低温保存后生活力检测

解冻后生活

力测定

冷冻前处理

繁殖体

图1药用植物繁殖体直接超低温保存技术流程图

繁殖体

解冻后生活力测定

图2

冷冻前处理包埋干燥法

预处理

包埋玻璃化法

繁殖体超低温保存后生活力检测

繁殖体超低温保存后生活力检测

冷冻

中超低温保存

药用植物繁殖体包埋法超低温保存技术流程图

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