响应面法快速优化曲霉Aspergillussp.F044产脂肪酶培养条件 .pdfVIP

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第３７卷第１期工业微生物ＶｏＬ３７ＮＯ．１

２００７年２月ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＦｅｂ．２００７

响应面法快速优化曲霉

Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐ．Ｆ０４４产脂肪酶培养条件

陈晖，杨江科，刘曼西，闰云君

（华中科技大学生命科学和技术学院，武汉４３００７４）

摘要运用逐因子试验（Ｓｅｒｉａｔｉｍ—ＦａｃｔｏｒｉａｌＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ）、Ｐｌａｃｋｅｔｔ—Ｂｕｒｍａｎ、ＲｅｓｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅ

Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ＲＳＭ）和单因子试验（ＭｏｎｏｆａｃｔｏｒｉａｌＥｘｐｅｒｍｅｉｎｔ）分析对产脂肪酶曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ

ｓｐ．Ｆ０４４产酶培养条件进行了快速优化。首先运用逐因子试验确定Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐ．Ｆ０４４产脂肪酶

最适碳源和氮源，分别为麦芽糖和牛肉膏。在此基础上，通过Ｐｌａｃｋｅｔｔ—Ｂｕｒｒｍａｎ设计对影响其产酶

相关因素进行评估并筛选出具有显著效应的橄榄油、牛肉膏、硫酸镁三个因素。然后通过实验拟合

上述三因素与发酵液脂肪酶活力的一阶线性模型，沿着一阶模型给定的路径进行最速上升试验，在

上升最高点处由中心组合试验和向应面分析确定其最优培养基组成；最后通过单因子试验确定最

适发酵温度和摇床转速。试验优化的最优培养条件为：麦芽糖１．５％（ｗ／ｖ），硫酸铵７％ｏ（ｗ／ｖ），磷酸

氢二钾１％ｏ（ｗ／ｖ），牛肉膏１．２５％（ｗ／ｖ），硫酸镁２．１１‰（ｗ／ｖ），橄榄油１．４１％（ｖ／ｖ），自然ｐＨ，２５０ｒ／

ｍｉｎ和３０℃培养７２ｈ酶活达３２．１５Ｕ／ｍＬ。与初始１１．１８Ｕ相比，酶活提高２．８８倍。

关键词：脂肪酶；Ｐｌａｃｋｅｔｔ—Ｂｕｒｒｍａｎ设计；ＲＳＭ试验设计；优化

脂肪酶（Ｌｉｐａｓｅ，ＥＣ３．１．１．３）又称三酰基甘油出几个主效因子，供进一步研究。与随机平衡实

水解酶，在食品、医药、洗涤、皮革、造纸等行业领域验和部分因子实验相比，Ｐｌａｃｋｅｔｔ—Ｂｕｒｍａｎ设计在筛

运用相当广泛…。随着非水相酶学的运用与发展，选实验重要因子方面最为准确有效ｌ８Ｊ。响应面法

由于脂肪酶在油水介面上所具有的特殊性质，并可（ＲｅｓｐｏｎｓｅＳｕｒｆａｃｅＭｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ＲＳＭ）有效地结合

以催化各类化学选择性、区域选择性、立体结构选择数学方法和统计分析，通过对几个响应过程变量进

性转化反应等，促使脂肪酶在有机合成中得到广泛行数学建模和分析，能够定向地优化响应因子＿９］。

运用］。随着矿化石油资源枯竭和人们生态环境保与正交实验法相比，因其采用更为合理的实验设计，

护意识的提高，脂肪酶催化合成生物柴油作为可再能以较少的实验数量和时间对实验进行全面研究，

生替代环保燃料而为世人瞩目＿３。科学地提供局部与整体之间的关系，从而能取得更

在脂肪酶产酶条件优化方面，通常用于优化发为