基于UPLC—TQ—MS考察不同树龄果用银杏叶萜内酯含量变化规律 .pdfVIP

基于UPLC—TQ—MS考察不同树龄果用银杏叶萜内酯含量变化规

律

目的：建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法（UPLC-TQ-MS）同时

测定银杏叶中4个萜内酯成分的含量。方法：采用ACQUITYTMUPLCBEHC18

（2.1mm×100mm，1.7μm）色谱柱，以水（A）-甲醇（B）为流动相，等度

洗脱（70%A），流速0.4mL·min-1，柱温30℃；WatersXevoTMTQ质谱仪以

多反应离子监测（MRM）方式进行负离子检测。结果：各成分在5.0min内分离

良好，在相应的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数均0.9903；

加样回收率（n=6）为98.83%～103.9%，RSD均小于3%。不同树龄果用银杏叶

中萜内酯的含量差异较大，低树龄银杏叶含总内酯较高，随着树龄的增长，内酯

含量逐渐降低。结论：该方法简便、快速、重复性好、专属性强，适用于银杏叶

中萜内酯类成分的快速定量分析。

标签：UPLC-TQ-MS；果用银杏叶；萜内酯；树龄

银杏叶和白果具有独特的药理效应，广泛应用于食品、保健品、化妆品和药

品，是国内外研究与开发利用的热点，已逐渐成为全球植物药制剂与保健食品的

前列品种。银杏叶为银杏科植物银杏GinkgobilobaL.的干燥叶，其提取物制剂

在临床上用于治疗冠心病[1]、高血压[2]、脑梗死[3]、痴呆[4-5]、哮喘[6]、乙型

肝炎[7]、糖尿病[8]等疾病。银杏叶富含黄酮苷、内酯、双黄酮和原花色素，在

所含各类成分中，萜内酯类成分倍受人们的关注[9-12]。

早期许多分析方法用于银杏叶中萜内酯成分的分析。首先应用的

HPLC-RI[13-14]方法纯化样品耗时，很快被弃用。随后HPLC-UV[15-16]以及

ELSD[17-20]相继用于萜内酯成分的分析，由于萜内酯成分紫外吸收弱，2010年

版《中国药典》选择HPLC-ELSD用于银杏叶中萜内酯成分的分析，但该方法还

是有一些缺陷：①样品先用石油醚索式提取1h，然后用甲醇提取6h，样品前处

理比较繁琐耗时；②样品提取物需要过酸性氧化铝柱，此过程会导致白果内酯部

分被分解[21]，使其回收率降低；③所用检测器蒸发光散射灵敏度较低、定量限

较高，且实验中产生有害废气。为了避免以上问题，本实验建立UPLC-TQ-MS

方法，利用三重四极杆强大的多反应离子监测功能，样品提取后不需经过氧化铝

柱纯化样品的过程，直接测定银杏叶中4种萜内酯成分含量，并考察不同树龄果

用银杏叶中萜内酯的含量差异，为银杏叶及其相关产品的质量控制提供新的方法

参考。

1材料

WatersACQUITYUPLC系统（包括四元泵溶剂系统，在线脱气机和自动进

样器；Waters公司，Milford，USA）；XevoTQ检测器（Waters公司）；MassLynxTM

质谱工作站软件（Waters公司）；BT125型1/10万电子天平（赛多利斯科学仪器

有限公司）；EPED超纯水系统（南京易普达易科技发展有限公司）；KQ-250E型

超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；AnkeGL-16GII型离心机（上海

安亭科学仪器厂）。

对照品白果内酯（BB）、银杏内酯C（GC）、银杏内酯A（GA）、银杏内酯

B（GB）均为本实验室从银杏叶中分离得到，其化学结构经1H，13C-NMR，

MS和ELSD确定，纯度经HPLC检测均大于98%。

10月初采摘银杏果（白果），采过果后的银杏树的叶为本研究的样品收集与

研究对象，银杏叶采自山东郯城，树龄分别为10，15，20，25，30，50，100，

300年，银杏树龄由银杏栽培所在地的管理人员根据记录资料提供。经南京中医

药大学严辉博士鉴定为银杏科植物银杏G.biloba的干燥叶，样本存放于南京中医

药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室。

2方法与结果

2.1色谱条件

ACQUITYTMUPLCBEHC18色