生产维生素B _原创精品文档.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1685052A

(43)申请公布日2005.10.19

(21)申请号C0

(22)申请日2003.09.16

(71)申请人DSMIP资产公司

地址荷兰海尔伦

(72)发明人星野达雄长谷洋一郎市川敬子田副正明

(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所

代理人巫肖南

(51)Int.CI

C12P17/12

//(C12P17/12,C12R1∶41)

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

生产维生素B

(57)摘要

公开了一种能够生产维生素B

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

Claim1.一种能够生产维生素BSub6/Sub的中华根瘤菌属重组微生物突变体，

其具有含pdxJ基因的重组质粒，它获得了组氨酸需求或甘氨酸抗性，或其组合。

Claim2.根据权利要求1的突变体，其中所述突变体具有的甘氨酸抗性比重组微

生物最小抑制浓度高1.1倍。

Claim3.根据权利要求1的重组微生物，其中所述的重组质粒包括载体质粒

pVK100。

Claim4.根据权利要求1的重组微生物，其中吡哆醇-5’-磷酸盐合酶(pyridoxol5’-

phosphatesynthase)基因是来源于能生产维生素BSub6/Sub的中华根瘤菌属的

微生物。

Claim5.根据权利要求1的重组微生物，它是SinorhizobiummelilotiPY-EGCl。

Claim6.一种制备维生素BSub6/Sub的方法，其包括在pH值大约5.0到9.0

的培养基中，在含氧条件下，温度10℃到40℃培养1天到15天根据权利要求1的

微生物，从培养基中分离维生素BSub6/Sub。

Claim7.根据权利要求6的方法，其中该微生物是SinorhizobiummelilotiPY-EGCl。

说明书

p本发明涉及一种新颖微生物并涉及一种使用该微生物制备维生素

BSub6/Sub的方法。

本发明所使用的“维生素BSub6/Sub”包括：吡哆醇、吡哆醛和吡哆胺。维生素

BSub6/Sub是一种对人类或其它动物不可缺少的维生素，并被用作药物原料或

饲料添加剂。使用衍生自中华根瘤菌属(也被认为是Rhizobium)(EP765938)的微生

物制备维生素BSub6/Sub的方法，作为一种生产维生素BSub6/Sub的发

酵方法，已为人们所知。但是，人们有必要构建一种具有更高维生素

BSub6/Sub产量的新微生物并且有必要开发出一种改进的工业发酵方法，该发

酵方法能够利用所述微生物以十分高生产效力生产维生素BSub6/Sub。

根据本发明，有可能比以往的方法更有效地生产维生素BSub6/Sub。本发明

者首先构建一种能够生产维生素BSub6/Sub的中华根瘤菌属(Sinorhizobium)的

重组微生物，该微生物与一种含有带吡哆醇-5’-磷酸盐(pyridoxol5’-phosphate)合酶

基因(此后称为pdxJ)载体的重组质粒相融合。显示出该重组微生物维生素

BSub6/Sub生产量的提高。该重组微生物被进一步突变以获得组氨酸需求或甘

氨酸抗性的表型性状。这一突变微生物显示出进一步提高的维生素BSub6/Sub

生产力。同时获得了上述两种表型性质的突变体显示出维生素BSub6/Sub生

产力的急剧的增加，并且它们通过培养该微生物能够有效地在培养基肉汤(broth)中

生产维生素BSub6/Sub，且能够以所期望的纯度回收维生素BSub6/Sub。

本发明提供了一种能够生产维生素BSub6/Sub的中华根瘤菌属重组微生物