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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN108181399A
(43)申请公布日2018.06.19
(21)申请号CN201810064391.1
(22)申请日2018.01.23
(71)申请人新希望乳业股份有限公司
地址610063四川省成都市锦江区锦江工业开发区金石路376号
(72)发明人刘虎传谭莲英郭建范光彩钱成林张海涛宋艳梅夏忠悦林永裕刘论唐果
方琼燕
(74)专利代理机构四川力久律师事务所
代理人陈明龙
(51)Int.CI
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
一种乳制品中A2-β-酪蛋白含量的
检测方法
(57)摘要
本发明公开了一种乳制品中
A2‑β‑酪蛋白含量的检测方法，包括准备
样品和标准品：如果是奶粉则加水配制成
乳液，将乳液或牛乳离心脱脂；加入缓冲
液，涡旋混匀，静置10‑120min，离心
5‑20min；取下清液，加入缓冲液定容，
涡旋混匀，用0.45μmPTFE滤膜过滤过
滤，待上机检测；HPLC检测分析，采用
梯度洗脱程序进行洗脱，流动相A：0.1%
三氟乙酸、流动相B：0.1%乙腈。本发明
检测分析方法可以实现对于普通牛奶中
A1‑β‑酪蛋白和A2‑β‑酪蛋白亚型状态
检测分析研究，通过预处理以及色谱条件
的协同调整，实现对于两种亚型的充分分
离，进而结合标准品进行快速判断牛乳原
料是否属于纯品A2‑β‑酪蛋白亚型牛乳替
代现有基因检测分析方法，简化检测分析
研究的难度，降低检测分析成本。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.一种乳制品中A2-β-酪蛋白含量的检测方法,包括以下步骤:
S1、准备样品和标准品:
101样品准备:如果是奶粉则加水配制成乳液,将乳液或牛乳离心脱脂;加入缓冲液,涡
旋混匀,静置10-120min,离心5-20min;取下清液,加入缓冲液定容,混匀,用
0.45μmPTFE滤膜过滤过滤,待上机检测;
102标准品准备:称取αs-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白标准品各1mg至三个1.5mL
离心管中,加入缓冲液,溶解均匀,加入缓冲液定容,过滤,得到已知酪蛋白浓度的待上
机检测的标准品;
S2、色谱检测:
采用高效液相色谱依次检测标准品和样品,根据标准品中各个酪蛋白的保留时间,确
定样品中相应酪蛋白成分的保留时间以及峰面积,计算各种酪蛋白的含量;
色谱参数如下:
色谱柱:ZORBAX300AStalleBond300SB-C84.6*2505μm;
采用梯度洗脱程序进行洗脱,流动相A:0.1%三氟乙酸、流动相B:0.1%乙腈,洗脱程
序:
TableTableFormulaTableGroupColspecColspecColspecColspecTbo
dyRowentry时间/min/entryentry流动相A/%/entryentry流动相
B/%/entryentry流速
/mL/min/entry/RowRowentry0/entryentry75.7/entryentry24.3/ent
ryentry1/entry/RowRowentry2/entryentry71.2/entryentry28.8
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