实验五 免疫学应用 .pdfVIP

免疫学应用实验

一、E-玫瑰花环形成实验

掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法；

熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。

二、中性粒细胞吞噬功能测定

掌握中性粒细胞吞噬金黄色葡萄球菌实验的操作过程；瑞氏染色的基本

步骤及吞噬百分率的计算。

三、抗原抗体反应及免疫学标本片的观察

掌握抗原抗体反应的特异性；熟悉凝集反应的原理、方法和分类。掌握

胶乳凝集试验的原理，熟悉试验方法，了解其应用；熟悉沉淀反应的原理；

熟悉双向琼脂扩散、单向琼脂扩散的操作方法和结果分析。

（1）凝集反应

类风湿因子的检测

（2）观察琼脂中抗原与抗体反应的单扩和双扩的试验现象

A单向琼脂扩散试验

操作方法：

○制备含抗IgG抗体的琼脂板:溶化的3%琼脂、待冷至56℃时吸取1.5ml琼脂

1

与等量适当稀释的抗IgG抗体混合均匀。倾注于水平放置的塑料板上，制成厚薄

均匀的琼脂板。凝固后用打孔器打孔二排，每排5孔、孔距8—10mm，孔要圆整

光滑。

图示单向琼脂扩散试验模式

○加样:用微量加样器加样。

2

结果分析:

标准曲线的绘制及血清标本中IgG含量的测定。

○以各稀释度标准抗原孔沉淀环直径为横座标，相应孔中IgG含量为纵座标在

1

半对数座标纸上作图，画出标准曲线。

○依待检血清标本孔沉淀直径，查标准曲线，将查得的唾G含量乘以标本的稀

2

释倍数，即为血清中IgG的含量。

B双向琼脂扩散试验

操作方法：

○将1%生理盐水琼脂加热溶化。

1

○制备琼脂板:取洁净载片一片，放一水平台上，将溶化的2·5m1琼脂趁热用

2

吸管注于玻片上，使其自然流成平面，琼脂凝固后用打孔器打孔，去掉孔中的琼

脂。

○加样:中央孔中加入甲胎蛋白（AFP）诊断血清，1、4孔加肝癌病人阳性血清，

3

2、3、5、6孔加待检血清。加血清至满勿外溢。不可有气泡。

○加样后，将掠脂板放入有一定湿度带盖容器中，置37℃温箱，24小时观察结

4

果。

结果分析:

○1、4孔为阳性对照孔(加已知阳性标本)，与中央孔间出现乳白色沉淀线。

1

○其余各孔与中央孔如出现沉淀线，且一端与阳性对照沉淀线相吻合者为阳性。

2

证明该份血清含有甲胎蛋白。如两条沉淀线相交，表明二者抗原性不同，出现的

沉淀线另一种抗原抗体反应，不能判定阳性。

○如待检孔与中央抗体孔间未出现沉淀线为阴性，证明待检血清中没有甲胎蛋

3

白。

图示双向琼脂扩散试验结果

2、6孔：吻合沉淀线（阳性）。

5孔：交叉沉淀线（阴性）。

3孔：无沉淀线（阴性）。

四、巨噬细胞吞噬功能试验掌握巨噬细胞的生物学功能；熟悉巨噬细胞吞噬功

能试验的原理和操作方法。

实验原理：

巨噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，通常选用鸡红细胞作为吞噬颗粒，将其注

入小鼠腹腔中，腹腔中巨噬细胞则将鸡红细胞吞入。取小鼠腹腔液涂片、染色后

可见鸡红细胞被吞噬的现象，计数100个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞的细胞数可判

断其吞噬功能。

操作方法：

1、于验前3天，小白鼠腹腔内注射6%可溶性淀粉肉汤1ml。

2、试验当天于每只小鼠腹腔内注射0.5ml1%鸡红细胞悬液，并轻揉腹部。

3、注射后30min，将小鼠处死、取腹腔液涂片并行瑞氏染色。

4、油镜观察涂片。

实验现象与数据：

镜下可见吞噬细胞细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞胞浆呈红色，而核则染成蓝

色（鸡红细胞有细胞核）。计数100个吞噬细胞，并计算吞噬阳性细胞的百分率。

五、淋巴细胞转化实验

掌握分离的原理及操作方法，熟悉其意义及应用；掌握淋

巴细胞转化现象的试验方法和原理；熟悉淋巴母细胞形态学观察方法。

实验原理：

T淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性抗原（PHA、PWM和ConA）刺激均能

使细胞发生转化。T淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平，常被

作为细胞免疫功能指标之一。淋巴细胞转化试验可从周围血中分离出淋巴细胞