小鼠单抗腹水纯化步骤 .pdfVIP

小鼠单抗腹水纯化步骤

小鼠单抗是一种通过免疫响应体外制备的抗体，通常通过腹水提取方

式来获得。下面是小鼠单抗腹水纯化的一般步骤：

1.小鼠免疫

将小鼠注射目标抗原，通常使用免疫佐剂将抗原与免疫系统刺激起来。

免疫期间要注意小鼠的饮食和生活环境，保证其健康状态。

2.收集腹水

在免疫后，根据小鼠的体重和免疫剂量，使用注射器从小鼠的腹腔中

收集腹水。使用无菌器具，注意操作过程要无菌。

3.储存和预处理腹水

收集到的腹水用离心机离心，去除其中的杂质和细胞。然后将澄清的

腹水分装入无菌离心管中，并进行储存。

4.蛋白质浓缩和沉淀

将腹水进行浓缩，可以使用离心或超滤等方法。浓缩过程中要注意温

度和时间的控制，以避免蛋白质降解。浓缩后的腹水可以进一步进行封冻

保存。

5.抗原亲和纯化

使用亲和层析柱，将浓缩的腹水与目标抗原相互作用。亲和层析柱可

以选择已经与目标抗原结合的树脂，或者通过动态亲和层析的方法进行柱

填充。

6.纯化和洗脱

将亲和层析柱上结合的抗原-抗体复合物进行洗脱。可以使用洗脱液

来改变物质之间的亲和力，以实现复合物的解离。洗脱后的洗脱液可以进

行进一步的分析和检测。

7.鉴定和分析

对纯化后的抗体进行鉴定和分析，可以使用免疫层析、SDS-、

Westernblot等方法。这些方法可以检测纯化后的抗体的纯度、抗体滴

度和特异性。

8.储存和保存

将纯化后的抗体进行分装并储存，通常以冷冻的形式保存。在保存的

过程中要注意使用无菌的存储容器，避免污染和降解。

以上是小鼠单抗腹水纯化的一般步骤。根据实际需求和具体实验条件

的不同，可能会有所调整。另外，为了保证实验的安全和可重复性，建议

在进行实验前充分了解相关实验操作和操作流程，并遵守实验室安全规范。