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E玫瑰花环形成试验(ERosetteTest)

一、基本原理

正常人外周血中T细胞在体外能直接和绵羊红细胞(SRBC)结合形成玫瑰花样细胞

团。这是因为人的T细胞膜上具有能和SRBC膜上的糖蛋白相结合的受体，称为E

受体。已证实E受体是人T细胞所特有的表面标志，因此本试验可作为人外周血T

细胞的鉴定和计数，同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标，也是分离T细

胞的常用方法之一。本实验为示教内容，学生只看结果。

二、实验材料

1.肝素抗凝人外周血1ml。

2.淋巴细胞分层液(见附录)2ml。

3.0.5%SRBC悬液：将脱纤维的绵羊静脉血用Hanks液洗3次，再用Hanks液配

制为含压积SRBC为0.5%的悬液(约含SRBC8×107／m1)。

4.经SRBC吸收的灭活的新生小牛血清(NBS)，取无菌NBS置56℃水浴经30分钟

灭活，取已灭活的NBS2体积，加入经洗涤后的压积SRBCl体积，混匀后置37℃

温箱30分钟，离心沉淀，吸取上层血清即成。

5.Hanks液：pH7.4(见附录)。

6.血球计数板、尖吸管、载玻片、瑞氏(Wrights)染液等。

三、实验方法

1.取肝素抗凝血1ml加1mlHanks液，混匀后用尖吸管将其加在2m1分层液上。

2.离心2000rpm，30分钟，用尖吸管吸取血浆与分层液界面处富含淋巴细胞的

悬液置于另一洁净试管中。

3.用Hanks液以1000rpm，离心10分冲洗细胞两次，末次弃上清后再加入Hank

s液1ml，混匀，用微量加样器吸取0.02ml加于0.38ml白细胞计数液中，在血球

计数板上于低倍镜下计数，并根据下式算出每毫升细胞数。

然后用Hanks液配制成107／ml细胞悬液。

4.取107／ml细胞悬液0.1ml加0.1ml经SRBC吸收的灭活NBS，再加0.2ml0.5%SRBC

悬液，混匀，放37℃温箱5分钟，低速离心500rpm，5分钟，然后放4℃冰箱2小

时或过夜。

四、实验结果

计数200个淋巴细胞，凡结合3个SRBC以上者为E玫瑰花阳性细胞，求

出百分率即为T细胞百分比。正常值为68±9.9%。

五、注意事项

SRBC自绵羊体内取出后限在2周内使用。