N6-Methyladenosine(m6A)修饰调控高粱耐盐性的功能研究.pdfVIP

目录

中文摘要I

AbstractIV

常用英文缩略词及中英文对照表IX

第一章文献概述1

1.1高粱耐盐概述1

1.1.1高粱概述1

1.1.2高粱耐盐概述2

6

1.2mA修饰概述6

6

1.3mA检测技术6

6

1.4mA调节蛋白8

1.4.1Writers8

1.4.2Erasers9

1.4.3Readers9

6

1.5mA修饰的分子功能10

1.5.1RNA稳定性10

1.5.2基因表达11

1.5.3可变多聚腺苷酸化13

1.5.4翻译13

1.5.5其他表观修饰13

1.5.6相分离14

6

1.6mA修饰的生物学功能15

6

1.6.1mA调节植物发育15

6

1.6.2mA调节植物生物胁迫抗性17

6

1.6.3mA调节植物非生物胁迫抗性17

1.7本研究目的及意义19

第二章实验材料与方法21

6

2.1高粱中mA组分的生物信息学分析21

2.2材料处理21

2.3目的片段的克隆、回收、连接以及载体构建22

2.3.1总RNA提取22

2.3.2cDNA合成22

2.3.3目的基因扩增23

2.3.4目的基因的PCR产物回收24

2.3.5目的基因连接载体24

2.3.6载体转化大肠杆菌25

2.3.7质粒提取26

2.3.8表达载体转化农杆菌27

2.4亚细胞定位27

2.5siRNA介导的基因抑制28

2.6高粱敲除株系及过表达株系的获得28

2.7耐盐生理指标的测定29

2.7.1离子含量测定29

2.7.2酶活测定29

2.7.3DAB和NBT染色29

2.7.4激素含量的测定29

2.8RT-qPCR29

6

2.9mA-IP-qPCR30

6

2.10totalmA水平测定30

6

2.11mA-seq和RNA-seq30

6

2.12mA-seq及RNA-seq数据分析31

2.13mRNA稳定性的测定31

2.14差异显著性分析31

第三章实验结果及分析32

6

3.1高粱中mA调控组分的鉴定及表达模式分析32

6

3.1.1高粱mA修饰响应非生物胁迫变化32

6

3.1.2高粱mA系统组分基因的鉴定和结构特征33

6

3.1.3高粱mA调控基因的系统发育分类35

6

3.1.4高粱mA调控基因启动子区顺式作用元件的