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高效液相色谱仪操作规程

1、开机：依次打开总电源、2695主机及需要使用的检测器电源开关，机器开始自我检

查。待仪器自我测试完毕后，屏幕状态显示区会出现“idle”字样，表示开机测试正常。

2、脱气设定：打开氦气瓶调节压力为0.4MPa，按“Menu/Status”键，进入Status(1)画

面，利用方向键将光标移至“Sparge”位置，分别设定欲使用溶剂瓶A、B、C或D之流量为

10%，此时可见到溶剂瓶内间歇地有气体吹出。

3、干洗：当溶剂的管子是空的时候，或是更换溶剂的时候，执行DryPrime(干洗)，按

“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，按“DirectFunction”功能键，选择“DryPrime”，

按Enter，按下欲使用的溶剂开启阀门(例如：OpenA)，用注射器抽取溶剂，看到有溶剂流出

即可，抽取完毕后关闭阀门，在“Enteraduration”中输入1分钟，按“Continue”键，Pump

即以3.0mL/min的流速作Purge。重复以上步骤，将所要使用的流动相溶剂都进行干洗。

4、湿洗：赶走气泡的时候，执行WetPrime(湿洗)，但一般干洗之后要进行湿洗。按

“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Composition”字段，将欲

WetPrime得溶剂输入100%，按按“DirectFunction”功能键，选择“WetPrime”，按Enter，

设定FlowRate：5mL/min，Time：1.0min，然后按下“OK”键，Pump即开始做WetPrime

动作。重复上诉步骤直到所有溶剂做完WetPrime。

5、平衡色谱柱：按照实验需要的色谱条件在“Composition”中设定流动相的比例，将

流速以每次增加0.2mL/min的速度增加到需要的流速。

6、进样：将待测的溶液装入样品瓶中，样品需要经0.45um滤膜过滤，然后放入样品盘

中。利用Empower操作软件设定仪器条件，检测波长等，进行进样操作。

7关机：将流动相改为纯甲醇，流速为0.2mL/min，冲洗管路及柱子30min(如果使用的

流动相中有盐溶液，则先用水冲洗柱子20min，再改为纯甲醇冲洗)，结束后以每次降低0.1

mL/min的流速降至0后，将光标移至“Sparge”位置，设置为0，然后关闭氦气瓶阀门，主

机开关，检测器开关机变压器开关。

注意：流动相溶剂必须为HPLC级，配制溶液需使用超纯水，并且用0.45um滤膜过滤。

流动相在使用前应脱气超声20min。