DB51T 1523-2012 桑蚕白僵病诊断技术规程　　.docxVIP

ICS

DB51

四川省地方标准DB51/T1523—2012

桑蚕白僵病诊断技术规程

2012-12-20发布2013-03-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/XXXXX-2012

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试剂 1

5仪器、设备 1

6观察 1

7判定 3

8附录A 4

DB51/XXXXX—2012

Ⅱ

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局发布。

本标准起草单位：四川省蚕业管理总站、四川省农业科学院生物技术与核技术研究所、乐山市蚕种质量检疫检验站、内江市蚕种质量监督检验站。

本标准主要起草人：吴钢、蔡平钟、张学清、马露芸、颜建平、何东。

DB51/XXXXX-2012

1

桑蚕白僵病诊断技术规程

1范围

本标准规定了四川省桑蚕白僵病诊断的技术要求。本标准适用于四川省桑蚕白僵病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

白僵病whitemuscardine

白僵菌属中不同种类的白僵菌寄生桑蚕感染发病，病蚕尸体被覆白色或类白色分生孢子的一类真菌性蚕病。

4试剂

4.1酒精[w(CH?CH?OH)=70%]。

4.2分析用水按GB/T6682规定执行。

4.3马铃薯蔗糖琼脂培养基(见附录A)。

5仪器、设备

5.1普通光学显微镜、相差显微镜，冰箱，高压灭菌锅，超净工作台，恒温培养箱，天平(感量0.1g)。5.2载玻片、盖玻片、培养皿、吸管、玻璃棒、分装漏斗，量筒、烧杯、锥形瓶(500mL、250mL)、试管(10mm×75mm),样品袋、冻存管(1.8mL、5mL),解剖剪、镊子、接种针/环、牛皮纸、不锈钢锅(1000mL～2000mL)、电炉(500w~1000w)、药勺、纱布、棉塞。

6观察

6.1外观观察

2

DB51/XXXXX-2012

观察桑蚕是否具有下列症状。

6.1.1幼虫症状

发病初期体色略暗，反应迟钝，行动略显呆滞；发病后期体壁常现油渍状或暗褐色不规则病斑；眠期发病，多呈半脱皮或不脱皮蚕；濒死时排软粪，吐胃液，体液略呈乳白色；初死时头部前伸，肌肉松弛，略有弹性，后逐渐变硬；死后1d~2d,尸体的气门、口器及节间膜处长出菌丝及白色粉末，逐渐增多，布满全身。

6.1.2蛹、蛾症状

蛹期发病，病蛹死亡前弹性降低，无蠕动能力，死后胸部缩皱，失水干瘪，皱褶及节间膜处逐渐长出菌丝及白色粉末；蛾期发病，不能产卵，死后尸体干瘪，翅、足易折断。

6.2显微镜观察

6.2.1样品采集

采集6.1描述的典型个体症状病蚕，置于样品袋或冻存管中，做好记载。

6.2.2样品处置

6.2.2.1样品保存

样品随机分成2份，一份作为检样供检验；另一份作为备样，保存于0℃~4℃冰箱中，保存期

30d～60d。

6.2.2.2样品制备

6.2.2.2.1取濒死病蚕，经酒精[w(CH?CH?OH)=70%]进行蚕体消毒，用解剖剪剪去尾角，滴1滴～2滴血液，涂抹于载玻片上(过干或过浓时，可滴加1滴～3滴无菌水),盖上盖玻片，制成镜检样本。6.2.2.2.2用镊子夹取病死蚕尸体覆盖的白色粉末，置于载玻片上，滴入1滴～3滴无菌水，捣烂，盖上盖玻片，制成镜检样本。

6.2.3镜检观察

将镜检样本分别置于显微镜(15×40倍或16×40倍)下观察，每个样本观察不少于20个视野。

6.3接种观察

以下操作在超净工作台或无菌培养室进行。

6.3.1提取病原

按6.2.2.2.1方法取3头~6头出现相同症状病蚕血液各1滴～3滴，或按6.2.2.2.2的方法取3头~6头病蚕(蛹)身上的白色粉末各少许，分别置于无菌试管中，各加1滴~3滴无菌水，用无菌玻璃棒搅拌均匀。

6.3.2分离培养

将6.3.1制备的血液或白色粉末样品，用接种环(针)划线接种于马铃薯蔗糖琼脂无菌培养基上，在28℃±1℃的恒温培养箱中培养2d~5d