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方法：

ProteinA是一种金葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是

IgG）的Fc区结合。因而，将ProteinA与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可用于抗体

纯化的亲和填料。C产品是用ProteinA柱纯化；本标准操作程序使用Enzo公司产的试剂

盒，采用酶联免疫吸附法（ELISA）确定C产品中的宿主ProteinA残留量。

适用范围：

本标准操作程序适用于纯化中和纯化后的各中控样品和产品的ProteinA残留分析。

职责：

操作人员：

严格按照此规程要求进行操作。

岗位主管：

起草文件，并确保操作程序的准确性、技术内容的完整性及文件的及时更新；

监督操作规程是否与实际过程一致，资源是否满足要求；

培训，确保此操作规程的正确实施。

程序：

1术语解释

无

2仪器设备

2.1移液管，200μL，1000μL；1200μL；

2.2多通道移液器，300μL；1200μL；

2.3单通道移液器，100μL；200μL；1000μL；

2.41.5mlEP管；

2.5已包被鸡抗ProteinA的抗体的微孔板条；

2.6塑料密封膜（Enzo，型号30-0012）

2.7震荡器（Heidolph，型号TITRAMAX1000）；

2.8漩涡混合器（精科实业，型号XW-80A）

2.9高速台式离心机（安亭，型号TGL-18B-C）

2.10带有SOFTmaxPRO5.3数据分析软件的酶标仪（MolecμlarDevices，型号THERMOmax）。

3试剂

3.1ProteinAELISA试剂盒（Enzo，Cat.#：ADI-900-057）。

ProteinA抗体包被96微孔板80-0348

试验缓冲液（AssayBuffer13），55ml80-1500

黄颜色ProteinA生物素标记抗体，10ml80-0346

ProteinA链酶亲和素，10ml80-0347

ProteinA标准品浓度为10,000pg/ml80-0621

20x浓缩洗液(WashBufferConcentrate)，100ml80-1287

TMB底物（TMBsubstrate），10ml80-0350

终止液（Stopsolution2），10ml80-0377

ProteinA试剂放置板（ProteinAAssayLayoutSheet），1块30-0100

密封胶带（platesealer），2张30-0012

3.21×洗液：用超纯水将20×洗液稀释到1×，用量根据实际需要配制。

4实验程序

4.1ProteinA标准品梯度稀释：取7个1.5mlEP管，依次标记为1、2、3、…7；1号EP管