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免疫分析技术研究进展

摘要：目的：综述免疫分析技术的最新研究进展。方法：通过查阅国内外

有关免疫分析技术的研究论文，对放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、荧光

免疫分析(FIA)、化学发光免疫分析(CLIA)等免疫分析技术进行了综述，同时指

出了发展前景和尚待解决的问题。结果：多种免疫分析方法相互结合，可大大提

高分析方法的灵敏度，增大检测范围；CLIA和TRFIA是非放射免疫分析的两大

主流，其中，CLIA更具有竞争力。结论：目前还没有一种免疫分析技术是完美

无缺的，各种技术还需要不断发展和完善，以开发出更新、更理想的免疫分析技

术。

关键词：药物分析学；免疫分析；放射免疫分析；酶免疫分析；荧光免疫分

析；化学发光免疫分析

免疫分析法(immunoassay，IA)是基于抗原和抗体特征性反应的一种技术。

由于免疫分析试剂在免疫反应中所体现出的独特的选择性和极低的检测限，使这

种分析手段在临床、生物制药和环境化学等领域得到广泛应用。各种标记技术(放

射性标记、荧光标记、化学发光、酶标记等)的发展，使免疫分析的选择性更加

突出。免疫分析法起始于本世纪50年代，首先应用于体液大分子物质的分析，

1960年，美国学者Yalow和Berson等将放射性同位素示踪技术和免疫反应结合

起来测定糖尿病人血浆中的胰岛素浓度，开创了放射免疫分析方法的先河。1968

年，Oliver将地高辛同牛血清白蛋白结合，使之成为人工抗原，免疫动物后成功

获得了抗地高辛抗体，从而开辟了用免疫分析法测定小分子药物的新领域。在

RIA的基础上，随着新的标记物质的发现及新的标记方法的使用，以及电子计算

机、自动控制技术的广泛应用，派生出许多新的检测技术[1]，使免疫分析法逐

渐发展成为一门新型的独立学科。

1免疫分析方法分类

(1)根据标记物的不同，可以免疫分析主要分为放射免疫分析

(radioimmunoassay，RIA)、酶免疫分析(enzymeimmuoassay，EIA)、化学发光免

疫分析(chemiluminescentimmunoassay，CLIA)、荧光免疫分析法(fluorescence

immunoassay，FIA)等。

(2)按反应机制的不同，可以分为竞争法和非竞争法。非竞争法是将待测抗

原与足够的标记抗体充分反应形成抗原-标记抗体复合物，产生的信号强度与抗

原的量成正比。竞争法是将过量的待测抗原与定量标记抗原竞争结合形成定量的

特异性抗体，待测抗原的量越大，与抗体结合的标记抗原量越少，产生的信号强

度越小，由此定量待测抗原的量。

(3)还可以按测定过程中的某些步骤的差异分为均相免疫分析和非均相免疫

分析两大类。均相酶免疫测定法的特点是抗原-抗体反应达到平衡，对结合与游

离的标记物无需进行分离，可在自动生化分析仪器上直接测定。非均相酶兔疫测

定法的特点是必须对结合和游离的标记物进行分离，才能测定各自的浓度。

2放射免疫分析(RIA)

放射免疫分析是以放射性同位素为示踪物，与免疫反应相结合的一种分析方

法，提供的检测信号是不断发出的放射线。常用来标记的放射性同位素有3H、

14C、1251、1311等。

放射免疫分析在应用上的优点是准确灵敏、特异性强，仪器试剂价格低廉、

技术成熟，在我国仍将在相当长一段时间内被应用、推广和发展。然而，其在应

用上的缺点也是显而易见的，如药盒的使用寿命短，批间、批内变异较大，虽涉

及放射性微小，但仍会面临公众反核的负面影响。此外，放射免疫分析较难进行

自动化分析，将面临新一代更灵敏、稳定、快速而且自动化程度高的测量技术的

挑战。

3酶免疫分析(EIA)

酶免疫分析是一种非放射性标记免疫分析技术，以酶标记抗原或抗体作为示

踪物，由高活性的酶催化底物显色或发光，达到定量分析的目的。最初应用的

EIA技术，多采用HRP标记抗体或抗原，灵敏度不高。后来逐步发展了各种放

大体系，如底物循环放大体系、酶联级放大体系、生物素-亲和素放大体系、脂

质体或红细胞等作为标记物载体以包载大量标记物的放大体系，以及采用PCR

技术的PCR-EIA分析，使灵敏度有很大改进。

3.1生物素-链亲和素酶免分析(biotinavidinsys-temBAS-EIA)

生物素(