标准操作规程(SOP)——流感禽流感单放射免疫扩散溶血技术抗体检测.pdfVIP

人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

标准操作规程（SOP）——流感/禽流感单放

射免疫扩散溶血技术抗体检测

一、目的

该文件用以说明单放射免疫扩散溶血技术（SRH，SingleRadialHemolysis

Technique）的详细操作过程和操作规范以及结果判定标准。该技术是一种简便、

可靠、重复性好、特异性强、敏感性高的血清抗体测定方法，本文件确保使用该

技术时操作规范，从而确保实验结果准确可靠，得到准确、可重复的血清抗体滴

度。

二、范围

适用于中国国家流感中心所有技术人员进行流感/禽流感单放射免疫扩散溶

血技术对血清中的抗体进行检测。

三、程序

（一）生物安全要求

抗原的制备和血清灭活在根据所从事病毒的种类在相应的生物安全级别实

验室进行，SRH检测在生物安全二级（BSL-2）实验室进行操作。

（二）材料

1．Alsever’s液

葡萄糖2.05g

酸钠0.8g

酸0.055g

氯化钠0.42g

蒸馏水加至100mL

上述药品加微热溶解后，过滤，以121℃20min灭菌，放4℃保存。

2．pH7.2PBS缓冲液

1包PBS粉剂（Gibco或Sigma）溶于1000mL去离子水中。121℃高

压灭菌，置4℃保存，保存期为3周。

人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

3．10%叠氮钠（sodiumazide，NaN）溶液

3

10gNaN3加入灭菌过的去离子水至100mL，溶解后置4℃保存。

-4

4．5×10mol/LKIO（过碘酸钾）溶液

4

11.5mgKIO4加入pH7.2PBS溶液至100mL，完全溶解后置4℃保存。

5．1%琼脂糖

1g琼脂糖（最好用超纯化、低熔点，BiowestAgaroseShanghai）加入

pH7.2PBS至100mL，煮沸使完全溶解，立即分装，恒温于60℃水浴中，

也可冷却后置4℃保存，时间不超过一个月。

6．1%鸡红细胞悬液，按《1%鸡红细胞悬液配制SOP》进行配制。

7．浓鸡红细胞，按《1%鸡红细胞悬液配制SOP》相关步骤进行配制。

8．补体的制备

至少6只健康成年豚鼠，采血前一天下午禁食，第二天上午从心脏采

血，每只可采5～10mL，每只采完后速至冰上，多只豚鼠血清混匀后使

用，当天分离血清，分装，置-70℃冰箱中保存。由于补体耐热性差，因

此，操作时尽量在4℃条件下进行。

9．抗原

一般采用接种鸡胚尿囊腔后收获的流感/禽流感病毒液，甲醛灭活的病

毒需在-70℃中保存，并且注意避免反复冻融。

10．参比血清

由国家流感中心统一提供的抗H5N1病毒参比兔血清及普通流感病毒