生物制药工艺技术基础.ppt

**************************************************************************几种常用的凝胶：（1）葡聚糖凝胶：基本骨架是1-6糖苷键。由葡聚糖和甘油以醚桥形式交联而成的网状结构。最著名的商品为Sephadex葡聚糖凝胶，珠状颗粒物，化学性质稳定，不溶于水、弱酸、碱和盐溶液。低温时，在0.1mol/L盐酸中保持1-2h不改变性质；室温时，在0.01mol/L盐酸中放置半年也不改变；在0.25mol/L的氢氧化钠中，60℃两个月没有发改变。可在120℃加热30min灭菌而不破坏，但高于120℃即变黄。湿状贮存易发霉，若长期不用，需加防腐剂。第62页,共80页，星期六，2024年，5月（2）聚丙烯酰胺凝胶：由碳-碳骨架构成。完全为惰性。稳定性比葡聚糖凝胶好，洗脱时不会有凝胶物质下来。缺点：不耐酸。遇酸时酰胺键会水解为羧基，使凝胶带有一定的离子交换基团。（3）琼脂糖凝胶：天然凝胶，不是共价交联，是以氢键交联。空隙度以契纸糖的浓度来改变，化学稳定性不如葡聚糖凝胶。没有干凝胶，必须在溶胀状态保存，遇脱水剂、冷冻和一些有机溶剂即破坏，丙酮和乙醇对它无影响。在pH4.5-9,温度0-40℃稳定。对硼酸有吸附，不能用硼酸缓冲液。能分离几万到几千万相对分子质量的物质，弥补了葡聚糖和聚丙烯酰胺凝胶的不足。瑞典商品名Sepharose，美国称Bio-GelA,英国称Sagavac.(4)疏水性凝胶：常用的为聚甲基丙烯酸酯（Polymethacrylate）凝胶、聚苯乙烯凝胶（如Styrogel,Bio-Beads-S）第63页,共80页，星期六，2024年，5月7、亲和层析生物活性物质都有亲和作用，如酶与底物、激素与受体、核酸的互补链间，多糖与蛋白质复合体。亲和层析是利用生物大分子的特异亲和力而设计的层析技术。可逆结合的特异性物质称为配基，与配基结合的层析介质称为载体。亲和层析能从粗提液中，通过一次简便处理，便可得到高纯度的活性物质，既可分离一些生物材料中含量极微的物质，又能分离一些性质十分相似的物质。优点：设备要求不高，操作简便，适用范围广，特异性强，分离速度快，效果好，条件温和。缺点：通用性较差，洗脱条件要求苛刻。第64页,共80页，星期六，2024年，5月几种常用的载体：（1）纤维素：自然界中数量最大的大分子生物材料，取材十分方便。但由于其结构紧密、均一性差，不利于大分子的渗入。活化后常带有电荷，非特异性吸附较强，加上空间位阻等原因，其应用不如凝胶载体广泛。目前主要用于分离与核酸有关的物质。如用寡聚脱氧胸腺核苷酸纤维素作固定相分离细胞提取液中的mRNA.市售商品有：无定型微纤维、微晶纤维素、珠状纤维素。第65页,共80页，星期六，2024年，5月（2）琼脂糖凝胶：用于亲和层析的主要为交联珠状凝胶。其琼脂糖的质量浓度为20g/L(2%)、40g/L(4%)、60g/L(6%)几种，相应的商品称为Sepharose2B、4B、6B(Pharmacia)和UltrogelsA-2,A-4,A-6)。这类载体能使吸附物质保持活性，能迅速活化并接上各种功能基团，结构疏松孔径大，流速快。（3）葡聚糖凝胶：与琼脂糖凝胶相比孔径太小，特别是经配基偶联后，凝胶膨胀度会进一步变小，所以应用受到限制。（4）聚丙烯酰胺凝胶：碳-碳骨架，有丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，具有网状三维空间结构。商品名为BiogelP。注意避免接触强氧化剂，配基偶联后会使它的网格缩小，在一定程度上限制了它的应用。第66页,共80页，星期六，2024年，5月（5）多孔玻璃珠：化学和物理稳定性好，机械强度高，不但能抵御酶及微生物的作用，还能耐受高温灭菌和较剧烈的反应条件。缺点：亲水性不强，对蛋白质尤其是碱性蛋白质有非特异性吸附，而且可供连接的化学活性基团也少。改良方法：为了克服其缺点，市售Bio-Glass的商品都已事先连接了氨烷基（烷基胺）。用葡聚糖包被玻璃珠，则可改善其亲水性，并增加化学活性基团。用抗原涂布的玻璃珠已成功地分离了免疫淋巴细胞，在DNA连接的玻璃珠上纯化了大肠杆菌的DNA和RNA聚合酶。第67页,共80页，星期六，2024年，5月（6）其他载体：由聚丙烯酰胺和琼脂糖混合组成的载体，商品名为UltrogelsACA。它的特点是载体上既有羟基又有酰胺基，并且都能与配基单独作用。但