生化仪检测原理及应用.ppt

*其他参照标准：临床实验室试剂级水[Clinicallaboratoryreagentwater(CLRW)]标准。CLSIC3-A4,2006最新版文件。*7600基本设置第22页,共53页，星期六，2024年，5月双波长：有两个不同的波长即测量波长（主波长）和参比波长（次波长）。由检测器测出的吸收度是这两个波长下吸收度的差值△A。△A与被测定物质的浓度成正比，这个方法称双波长法。双波长差吸光度法具有可以克服样本混浊（溶血、脂血、黄疸）、共存组分吸收谱线叠加的干扰，以及减少比色杯的光学不均一等优点。

空白(blank)校正:在分光光度法中，常利用空白溶液来调节仪器的吸光度零点，或用来抵消某些测定的干扰因素。

第23页,共53页，星期六，2024年，5月第24页,共53页，星期六，2024年，5月第25页,共53页，星期六，2024年，5月湿化学常见的比色分析反应类型：直接测量：具有特征性的吸收峰，不经过任何反应直接在指定波长测量；单一反应：待测反应本身有特征性吸收峰的底物或产物量的变化；如ALB测定原理：白蛋白+BCG-----白蛋白-溴甲酚绿复合物溴甲酚绿复合物在波长为570nm处吸光度最强，固此法ALB主波长应设定在570nm；偶联反应：底物或产物无特征性吸收峰，需经过其他反应生成有特征性的吸收峰测量的化合物，这种反应称为指示反应。如ALT测定原理：L-丙氨酸+α—酸戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADH+H+乳酸+NADNADH在340nm处吸光度最强，其吸光度与NADH的浓度成正比，固ALT此法检测主波长应设定在340nm处。第26页,共53页，星期六，2024年，5月第27页,共53页，星期六，2024年，5月一点终点法：当待测物与试剂反应到达平衡，测定其吸光度，计算待测物浓度，该法在标本正常情况下较稳定，若空白对照较大时（如有干扰吸光度物质）影响检测真实值。

第28页,共53页，星期六，2024年，5月2、两点终点法：在被测物反应或指示反应未开始时，选择第一个吸光度点，在反应到达平衡后选择第二个吸光度点，两点吸光度点之差用于计算结果。

此法能有效减少标本溶血、脂血、黄疸造成的干扰。

第29页,共53页，星期六，2024年，5月3、连续监测法：在零级反应期连续测定酶促反应过程中底物或产物量的变化，求出酶反应初速度，间接计算出酶活力浓度。此法主要用于酶活性及其代谢物的测定，较终点法准确。第30页,共53页，星期六，2024年，5月4、两点固定时间法：指在时间-吸光度曲线上取尚在反应中的两点间的差值来计算结果，此两点既不是起始点也不是反应终点。

此法应选用酶反应的线性期进行测定，同时还应确定该法能测定酶活性的最高限度，对于超过此限的样品，应采用缩短反应时间或减少样品用量的办进行测定。

第31页,共53页，星期六，2024年，5月常见几种报警：

第32页,共53页，星期六，2024年，5月第33页,共53页，星期六，2024年，5月第34页,共53页，星期六，2024年，5月临床生化检验的校准与质控

第35页,共53页，星期六，2024年，5月常用的有Linear单点校准：需要设置一个标准品（浓度必须大于0），以原点和标准品的连线为校准曲线（横坐标为浓度C，纵坐标为吸光度A）。单点校准必须设置空白校准0点。Logistic-Log4P：标准品的数量至少为4个，其中第1个标准品的浓度为0，标准品的浓度必须从低到高的顺序排列。适用于随着浓度的增加需吸光度偏移的实验项目的标准曲线。Spline：此校准方式要求提供2~6个标准品，其中第1个标准品的浓度必须为0，标准品的浓度必须从低到高的顺序排列。计算方法：K因数法（1点线性法）-----由空白液的标准（C1）通过公式计算得出的K因数制成的曲线。K因数法测定C1（空白试剂）的吸光度时，先输入K值，再计算浓度值。公式：CX=K(AX-B)+C1第36页,共53页，星期六，2024年，5月②两点线性法----由空白液和含有一定浓度标准液的标准2的两点吸光度绘制的曲线(Y=aX+b,通过水来计算得到b,通过标准品来得到a.)。此法适用于所有的分析方法：1点法、2点速率法和速率法。常用项目：TP、ALB、TC、TG等

第37页,共53页，星期六，2024年，5月多点线性（非线性）----要提供至少4个标准品，第一个为活性为0，然后用二次函数或指数来描绘校准的曲线与公式。X=K/[1+A(Cx+C1)]+S1ABS

X：样本吸光度或吸光度的变化量；Cx：样本浓度；C1：标准液1浓度；常用项目：APOB、APOA、PA等。

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