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子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

甲醛分析方法验证

摘要：(S)-(-)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩基)丙胺（CAS号：116817-

84-6）合成工艺中用到多聚甲醛，导致最终生产的产品中有甲醛残留，甲醛在贮

存过程中，易被氧化成甲酸，甲酸在《2020版中国药典四部0861残留溶剂测定

法》中属于3类溶剂，需要控制残留量低于0.5%，且(S)-(-)-N,N-二甲基-3-羟

基-3-(2-噻吩基)丙胺用于生产合成原料药，残留的甲醛容易发生反应，产生其

他杂质，故(S)-(-)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩基)丙胺中需要严格控制甲

醛残留量。甲醛限度低，普通的滴定法受基质（样品）影响，无法准确定量，其

次，甲醛在气相和液相上响应偏低，为提高方法灵敏度，考虑将甲醛用2.4-二硝

基苯肼衍生成2，4-二硝基苯腙，通过HPLC检测方法测2，4-二硝基苯腙来检测

甲醛含量，并对方法做全面方法学验证。

关键词：甲醛；2.4-二硝基苯肼衍生；HPLC检测方法；分析方法验证

1.

方法背景

产品要求控制甲醛限度为0.1%，甲醛用2.4-二硝基苯肼衍生成2，4-二硝基

苯腙，需要摸索衍生条件，以及衍生产物适合的液相色谱条件，在按《2020版中

国药典四部9101分析方法验证指导原则》，完成一系列方法学验证，证明检测

方法适用于控制此产品中甲醛残留检测。

1.

衍生条件和液相色谱方法摸索

1.

溶液配制

1.

子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”——《论语》

稀释剂：2.4-二硝基苯肼（0.6g/L），取2.4-二硝基苯肼300mg，精密称定，

置流动相瓶中，量取500mL乙腈超声溶解，过滤备用。

2.

乙酸-乙酸钠溶液（pH=5.0）：称取乙酸钠2.64g，精密称定，量取500mL超

纯水超声溶解，再加入1.0mL乙酸，混匀，过滤。

3.

空白溶液：量取3.0mL乙酸-乙酸钠（pH5.0）加入10mL容量瓶中，用稀释

剂稀释至刻度，摇匀，密闭后置60℃水浴1h，放冷至室温。

4.

对照品贮备溶液（10ug/mL）：称取约270mg的37%甲醛溶液，精密称定，

至100mL容量瓶，加超纯水溶解定量稀释至刻度，精密移取1.0mL上述溶液至

100mL容量瓶中，加超纯水稀释定量稀释至刻度；

5.

对照品溶液（1ug/mL）：移取1.0mL的对照品贮备溶液至10mL容量瓶中，

加3.0mL乙酸-乙酸钠（pH5.0）溶液后用稀释液溶解定量稀释至刻度，摇匀，

密闭后移入60℃水浴锅进行衍生反应1h后，冷却至室温。

6.

供试品溶液(1mg/mL)：称取供试品20mg，精密称定，至20mL容量瓶中，

加入6.0mL乙酸-乙酸钠（pH5.0）后用稀释液溶解定量稀释至刻度，密闭后移

入60℃水浴锅进行衍生反应1h后，冷却至室温。

7.

加标供试品溶液(1mg/mL)：称取供试品20mg，精密称定，至20mL容量瓶

中，加入6.0mL乙酸-乙酸钠（pH5.0），加入对照品贮备溶液2.0mL，用稀释剂

溶解定量稀释至刻度；密闭后移入60℃水浴锅进行衍生反应后，冷却至室温。同

时配置3份，分别衍生40min、60min和80min