大肠杆菌PCR检测方法.pdfVIP

非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮

ICS11.220

B41DB21

辽宁省地方标准

DB21/XXXXX—XXXX

大肠杆菌PCR检测方法

MethodofPCRforthedetectionofEscherichiacoli

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（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

辽宁省质量技术监督局发布

非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮

DBXX/XXXXX—XXXX

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。

本标准主要起草人：赵凤菊，关淼，关乃鹏，李清竹，陈瑶

I

非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮

DBXX/XXXXX—XXXX

大肠杆菌PCR检测方法

1范围

本标准规定了大肠杆菌PCR检测方法的技术要求。

本标准适用于大肠杆菌的诊断、监测及流行病学调查，适用于猪粪便、脏器及纯培养物中大肠杆菌

的检测。

本标准中的试验操作应在生物安全Ⅱ级（BSL-2）以上的实验室进行。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

中华人民共和国农业部公告第302号兽医实验室生物安全技术管理规范

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

E.coli：大肠杆菌（Escherichiacoli）

DNA：脱氧核糖核酸（Diethylpyrocarbonate）

bp：碱基对（basepair）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleosidetriphosphate）

Taq酶：ExTaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

TAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸电泳缓冲液（Trisacetate-EDTAbuffer）

4原理

根据E.coli保守基因序列设计一对引物，在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以引物为延

伸起点，通过变性、退火和延伸，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。

5仪器和器材

本技术规范中需应用下列仪器和器材：高速台