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人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

免疫共沉淀（CoIP）_GE生命科学速递

免疫共沉淀（CoIP）作为一种研究蛋白质相互作用的经典技术被

广泛的应用于信号通路或生物学功能和机制的研究中。其主要包括两

个基本的步骤：一、利用ProteinA和ProteinG对抗体的特异性亲和

作用将抗体捕获。二、利用抗体对抗原的特异性结合将目标蛋白及其

相互作用的蛋白一起捕获。本篇文章将介绍从抗体捕获的角度来看

ProteinASepharose和ProteinGSepharose在免疫共沉淀实验中

的应用。

ProteinA与ProteinG各自的特点

ProteinA

ProteinA是金黄色葡萄球菌的表面蛋白，有5个不同的结合位点

对IgG的Fc片段具有很强的特异性亲和力，一个ProteinA分子至少

可以结合两个IgG分子。同时，IgA/IgM/IgE也有可能结合在Protein

A上。GE的ProteinASepharose类型非常丰富：

ProteinA：天然ProteinA，无动物来源组分。

•

rProteinA：重组ProteinA，C-端的Cysteine可以单一位点

•

定向偶联于琼脂糖基架上，降低空间位阻，提高抗体的结合能力。

rmpProteinA：重组ProteinA是多点结合于琼脂糖基架上，

•

有效减少脱落。

MabSelectSuRe：基于高流速琼脂糖基架的超高载量并耐碱清

•

洗的ProteinA填料。

ProteinG

ProteinG是一种源自链球菌G族的细胞表面蛋白，与ProteinA

一样ProteinG与IgG的Fc区域特异性结合，不同的是ProteinG还

可以特异性低亲和的与Fab区域结合。重组的ProteinG已经除去了

与白蛋白的结合位点，减少了非特异性结合。相比于ProteinA，

ProteinG可以广泛、更强地结合更多类型的IgG。

两者对于不同来源和亚型的IgG的亲和力如下图：

人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

ImmunoprecipitationStarterPack

•提供了nProteinASepharose4FastFlow与ProteinG

Sepharose4FastFlow各2ml

人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。——刘鹗

•非常适合针对不同种属来源和亚型的抗体捕获

•单次免疫共沉淀实验所需抗体极少（仅需1~5ug）

在利用ProteinASepharose和ProteinGSepharose捕获抗体

时的一些问题及建议：

实验背景较高，出现非特异性杂带

•建议一：设置阴性对