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生物润滑油生物降解性测试法

1范围

本文件规定了生物润滑油生物降解性的测定方法。

本文件适用于对比评估生物润滑油在水中的生物降解性和标准参考材料的生物降解性。本方法不适用于水溶性或挥发性材料。

2术语与定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

3方法概要

将含有矿物培养液（3.2.1）、试验油和接种物（3.2.3）的试验烧瓶与含有毒化样的烧瓶一起放置在培养箱中，培养时间为0d和21d。平行放置装有参比油（3.2.2）代替试验油的烧瓶。

在培养期结束时，对烧瓶中的内容物进行酸化、声波振动并使用1,1,2-三氯三氟乙烷萃取。然后通过红外光谱分析提取物，测量在2930cm-1波长处CH2-CH3的C-H键的最大吸收峰值。吸收值用于计算毒化瓶和试验瓶的残余油含量，求出试验油的生物降解率。

4仪器与材料

4.1仪器

4.1.1烧瓶：500mL，最小26口窄颈烧瓶，带玻璃塞。

4.1.2干净棉花：用于在培养过程中塞住烧瓶口。

4.1.3分液漏斗：500mL。每次重复试验单独使用一个漏斗。

注1：试验前，必须彻底清洁所有玻璃器皿，且不含碳氢化合物。适合的清洗方法是使用洗涤剂清洗，用自来水彻底冲洗，然后用去离子水或蒸馏水彻底冲洗，最后用萃取溶剂冲洗后彻底干燥。（标准级二氯甲烷是可接受的交替冲洗溶剂）。水中应无碳氢化合物。

注2：用于制备毒化样（6.1.4）的抗生素，可以吸附在玻璃器皿上。因此，为避免污染，建议每次连续运行时，对毒化样始终使用相同的烧瓶。

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T/CPCIF0090—2021

4.1.4离心机：可选。低温离心机，最大离心力为4000g，运行10min。

注3：高转速和高温可能会杀死细菌。

4.1.5超声波振荡器：输出功率为100W-200W，频率为20kHz-40kHz。

4.1.6恒温震荡培养箱：转速为120r/min-220r/min。

4.1.7红外光谱仪：单光束或双光束。

4.2材料

4.2.1矿物培养液Mineralmedium

矿物培养液的制备方法如下：

将下述各种盐的混合物用去离子水或蒸馏水溶解并稀释至1L溶液，制备溶液A、B、C、D。(1)溶液A：8.50gKH2PO4，21.75gK2HPO4，33.40gNa2HPO4?2H2O，15.00gNH4Cl。

(2)溶液B：22.50gMgSO4?7H2O。

(3)溶液C：36.40gCaCl2?2H2O。

(4)溶液D：0.75gH3BO3，3.00gFeSO4?7H2O，0.10gZnSO4?H2O，0.50gMnSO4?4H2O，0.05gCuSO4?5H2O，0.10gCoSO4，0.05g(NH4)6Mo7O24?4H2O。

从A、B、C、D4种溶液中各取1mL，然后用蒸馏水或去离子水稀释成1L溶液得到矿物培养液。

注5：水合化合物可由其他水合物或同等比例的无水材料代替。

注6：溶液D在使用前必须摇匀，因为金属盐会析出并引起浑浊。溶液D应每6个月制备一次。

4.2.2参比油

4.2.2.1RFLP

4.2.2.2RFDE

注7：参比/标准油数据需满足表1中规定的质量。

表1参比油

参比油

生物降解率/%

RFLP

35

RFDE

84

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注8：可以通过以下方式获得参比油：

天津内燃机研究所4.2.3接种物

试验中使用的接种物的细菌水平应在104CFU/mL-107CFU/mL（CFU为菌落形成单位，ColonyFormingUnit）范围内。可通过使用以下接种物实现：

（a）污水处理厂一级（机械）出水或

（b）生活污水处理厂的二级（生物）出水。有必要，可将接种物浓缩。

接种物应立即用粗糙的折叠滤纸过滤。如果不立即使用，则应在约6°C的温度下储存最多48h（包括收集时间）。可通过离心或膜过滤（最大孔径0.22μm）来调节粗滤接种物的浓度。必须用载玻片计数菌落。

4.2.4萃取溶剂

应使用光谱等级为1,1,2-三氯三氟乙烷（C2Cl3F3）。纯度应以十六烷为参照物，通过红外光谱（HC含量小于1μg/g）进行检查。

4.2.5母液

用萃取溶剂将15g待测润滑油配制成100mL试验油母液。用参比油配制