浙江专用2024年高考生物二轮复习专题八生物技术实践第17讲微生物的利用与酶的应用教案.docxVIP

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第17讲微生物的利用与酶的应用

[考纲要求]1.大肠杆菌的培育和分别。2.分别以尿素为氮源的微生物。3.果汁中的果胶和果胶酶。4.α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测。

1．培育基与微生物培育

提示(1)LB固体培育基添加琼脂等凝固剂，用于单菌落的分别。

(2)全养分LB培育基与尿素固体培育基：①全养分LB培育基(含琼脂糖)是基础培育基；②尿素固体培育基：选择培育基(如以尿素作为唯一氮源的尿素培育基)和鉴别培育基(如尿素培育基中加入酚红)。

(3)加入尿素前的固体培育基用高压蒸汽灭菌法灭菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤。

2．灭菌与消毒的比较

类型

适用范围

操作方法及留意点

消毒方法

煮沸消毒法

日常生活

100℃煮沸5～6min

巴氏消毒法

不耐高温的液体

70～75℃煮30min或80℃煮15min

化学药剂

水源或生物体结构部分等

擦拭，如用70%酒精擦拭双手；成熟紫葡萄用高锰酸钾浸泡5min；外植体在70%酒精中浸泡10min，再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5min，然后用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min

紫外线

房间、仪器设备

紫外线照耀30min

热水

泡菜坛等

热水清洗坛内壁两次

灭菌方法

灼烧

接种环、接种时用的试管口或瓶口等

干脆在酒精灯火焰的外焰烧红接种环或试管口和瓶口过火

高压蒸汽

灭菌

生产和试验室常用器具，如培育基、培育皿等

高压蒸汽灭菌锅内，条件一般为1kg/cm2，温度121℃，15min(若为葡萄糖，则灭菌条件为500g/cm2压力，温度90℃以上，30min)；灭菌时间从高压锅内有压力后起先；高压锅或灭菌锅压力和大气压相同时才能打开锅盖

过滤灭菌

尿素等加热会分解的物质

G6玻璃砂漏斗过滤。G6玻璃砂漏斗运用前用纸包好进行高压蒸汽灭菌；G6玻璃砂漏斗运用后用1_mol/L盐酸浸泡，抽滤去酸，再用蒸馏水洗至洗出液呈中性，干燥后保存

其他

操作空间：特地的接种室；

操作设备：超净台(用前打开紫外灯和过滤风，用时关闭紫外灯，台面用70%酒精擦拭)；

操作环境：酒精灯火焰旁

3．微生物分别的两种常用方法的比较

项目

划线分别法

涂布分别法

操作原理

连续划线。由于划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端起先，能使细菌的数目随着划线次数的增加而渐渐削减，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落

将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培育基的表面，进行培育。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培育皿表面形成单个菌落

操作工具

接种环

玻璃刮刀

运用要求

用时需灼烧

放置在70%酒精中，用时需灼烧

分别特点

操作简洁，不易分别获得单菌落

操作困难，易分别获得单菌落

分别结果(图示)

相同点

使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培育基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种

提示划线分别操作的留意事项

(1)每次划线之前及最终一次划线之后都须要灼烧接种环。

(2)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

(3)划线时最终一区域不要与第一区域相连。

(4)划线用力大小要适当，防止用力过大将培育基划破。

4．大肠杆菌的培育与分别操作

(1)原理

①接种在LB液体培育基中使其快速分裂增殖。

②将待检测微生物样品通过划线分别法或涂布分别法接种在LB固体培育基上，样品中的每一个细胞都可以生长繁殖形成单个菌落。

(2)流程

5．分别以尿素为氮源的微生物

(1)试验原理

①筛选以尿素为氮源的微生物，运用以尿素为唯一氮源的选择培育基进行培育。

②有些细菌合成的脲酶能通过降解尿素作为其生长的氮源。

③细菌合成脲酶能将尿素分解成氨，使培育基的碱性增加，pH上升，从而使加入酚红指示剂的培育基变红。

(2)操作步骤

提示分别以尿素为氮源的微生物中的易错点

(1)误以为分别以尿素为氮源的微生物时，配制的培育基中加入酚红作为酸碱指示剂，加入琼脂作为凝固剂。应加入琼脂糖作为凝固剂。

(2)误以为降解尿素的反应中反应物只有尿素。降解尿素的反应中反应物除了尿素外还有水。

(3)误以为尿素灭菌采纳高压蒸汽灭菌法。尿素遇高温会分解，所以其灭菌方法为G6玻璃砂漏斗过滤除菌。

6．探究酶活性最适条件和用量的试验设计

(1)探究影响果胶酶活性因素试验的分析

①试验原则：遵循单一变量原则、比照原则，严格限制变量，尽量削减无关变量的影响。

②试验原理：果胶酶活性受温度、pH或酶抑制剂的影响，在最适温度或pH时，其活性最高，果肉的出汁率、果汁的澄清度都与果胶酶的活性大小呈正相关。

(2)三个试验的变量分析

试验名称(目的)

自变量

因变量

留意事项

探究温度对果胶酶活性的影响

温度

果汁量(澄清度)

①底物和酶