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博观而约取，厚积而薄发。——苏轼
实验三血清总蛋白的测定
及其计量反应曲线的制作
【目的要求】
1.双缩脲法测定蛋白质含量的实验原理、关键技术和特点意义。
2.熟悉双缩脲法测定蛋白质的剂量反应曲线的制作方法与原则*
3.熟悉721分光光度计的使用和常规维护
【实验原理】
两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（HN-OC-NH-CO-NH），因分子内含有两个邻
22
接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应[A]，生成紫红色络合物。
NH
2
O=CNHNH2NH2
NH2135～190℃O=C2Cu2+O=CC=O
+△NHOHNHHN
NH2O=CˉO=CCu2+C=O
ˉ
O=C
NH↑NHNHHN
NH3222
2
尿素双缩脲紫红色络合物
［A］
蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条件下与Cu2+发生
双缩脲反应[B]，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10~120g/L
范围内有良好的线性关系。
OCOCCO
NHNHHN
RCHCu2+RCHHCR
Cu2+
OCOHˉ
NHOCCO
NHHN
RCH
RCHHCR
蛋白质等含肽键化合物紫红色络合物
［B］
据此，对已知系列浓度的蛋白标准液（S1~S5）做双缩脲反应，用其浓度作横坐标，吸
光度为纵坐标，即可绘出一条过原点的蛋白质
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