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基因工程知识点超全

基因工程

一、基因工程的概念

基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过

体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，

从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于

基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的额，因此又

叫做DNA重组技术。

基因工程的别名

操作环境

操作对象

操作水平

基本过程

基因拼接技术或DNA重组技术

生物体外

基因

DNA分子水平

剪切→拼接→导入→表达

实质（原理）基因重组

克服远缘杂交不亲和的障碍，定向改造生物的遗传特性

结果改造的方向

二、基因工程的基本工具

1、限制性核酸内切酶“分子手术刀”

2、DNA连接酶“分子缝合针”

3、基因进入受体细胞的载体“分子运输车”

1．“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制

酶）

（1）存在：主要存在于原核生物中。（2）特性：

特异性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，

并且能在特定的切点上切割DNA分子。

（3）切割部位：磷酸二酯键

（4）作用：能够识别双链DNA分子的并且使每一

条链某种特定核苷酸序列，

中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸

二酯键断开。

（5）识别序列的特点：

6）（切割后末端的种类：DNA分子经限制酶切割

产生的DNA片段末端通常有两种形式——黏性末端和

平末端。当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA

的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制

酶在它识别序列的中轴线处切开时，产生的则是平末

端。

种类

功能

特性

2．“分子缝合针”——DNA连接酶

（1）作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA

分子。

（2）类型

4

4

不异点：都连接磷酸二酯键

3．“分子运输车”——载体

(1)载体具备的条件：

①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

(2)最经常使用的载体是质粒，它是一种袒露的、

布局简单的、自力于细菌拟核之外，并具有自我复制

本领的双链环状DNA分子。

(3)其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒。

(4)载体的作用:

①作为运载工具，将目的基因送入受体细胞。

②在受体细胞内对目的基因进行大量复制。

【解题技巧】

(1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。

(2)限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理

化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。

(3)在切割目的基因和载体时要求用统一种限制酶，目的

是产生不异的黏性末了。

(4)获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生4个黏

性末端或平末端。

(5)不同DNA分子用统一种限制酶切割产生的黏性末了都

不异，统一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末

了一般不不异。

(6)限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记

基因，以便于进行检测。

(7)基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。

基因工程中的载体是DNA分子，能将目的

E·coliDNA连接酶

大肠杆菌

TDNA连接酶T噬菌体只能将双链DNA片段互补缝合两

种末了，但的黏性末了之间的磷酸二连接平末了之间的酯键连

接起来效率较低

基因导入受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透

性有关。

(8)基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。

例1．限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割

位点分别是－C↓AATTG－和－G↓AATTC－。如图透露表现

四种质粒和目的基因，个中，箭头所指部位为