实验一 薄层板的制备(1).pdf

实验一薄层板的制备、活度测定及应用

蔡国贤

1.目的要求

1.1掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法

1.2掌握吸附剂活度测定的原理及方法

1.3应用薄层层析法检测识中草药化学成分

2．实验原理

2.1薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合

物的分离、提纯及含量的测定。还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。

根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄

层层析；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属于分配薄层层析。薄层层析中

以吸附薄层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。

2.2吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能

力的不同，使各成分达到分离。吸附作用主要由于物体表面作用力、氢键、络合、静电引力、

范德华力等产生。吸附强度决定于吸附剂的吸附能力，还受被吸附成分的性质影响，更与展

开剂的性质有关。

2.3分配薄层层析的原理是，用极性溶剂吸苷在固体支持剂上所形成的混合物，铺成薄层（或

装柱），然后活化、点样（或上样），再用极性较弱的展开剂（或洗脱剂）进行展开。在展开

过程中，各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配。由于各成分在两相间的分配系数

不同，因而可以达到相互分离的目的。

2.4由于化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根

据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Ｒf）：

溶质的最高浓度中心至原点中心的距离

R

f溶剂前沿至原点中心的距离

化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。

在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离

之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可

以根据Rf值鉴别化合物。

2.5薄层层析可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达５００

mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。特别适用于那些挥发

性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。

3．实验步骤

3.1薄层板的制备

3.1.1氧化铝羧甲基纤维钠薄层

取氧化铝粉末一份，置烧杯中加适量的羧甲基纤维素钠溶液搅拌，直至混合成搅拌时，

物质能够在玻璃棒上掉下时成一条状，放置片刻，待杯里没有气泡后用药匙取一定量，分别

倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布），均匀涂布成0.25~0.5mm厚度，

轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，在水平位置放置，待薄层发白近干，于烘箱中110℃

活化0.5~1小时，冷后贮于干燥器内备用。活化温度和时间可依需要调整，一般检识水溶性

成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。

3.1.2硅胶G薄层

取硅胶G或硅胶GF一份，置烧杯中加水约5份混合均匀，放置片刻，待杯里没有气

泡后用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布），均匀

涂布成0.25~0.5mm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，在水平位置放置，待薄层

发白近干，于烘箱中110℃活化0.5~1小时，冷后贮于干燥器内备用。活化温度和时间可依

需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，

不经活化即可贮存备用。

3.1.3硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层

取羧甲基纤维素0.2g，溶于25ml水中，在水浴上加热搅拌使完全溶解，静置一夜，取

上层清液，加薄层层析用硅胶（颗粒度10~40μm的约6~8g）。激光照排系统混成均匀的稀

糊，按照硅胶G薄层涂布法制备薄层，或取0.8%羧甲基纤维纳10ml，倒入广口瓶（高约

10~12cm）中，然后逐步加入薄层层析用硅胶3.3克，不断振摇成均匀的稀糊，把两块载玻

片面对面结合在一起，这样每片只有一面与硅胶糊接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢

取出，分开二块薄片，将未粘附硅胶糊的那一面水平放在一张清洁的纸上，让其自然阴干，

100℃下烘30分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗的硅胶稀糊可贮存