DB12T 843-2018 绿豆源成分检测定性PCR法　　.docxVIP

ICS65.020.20B04

DB12

天津市地方标准

DB12/T843—2018

绿豆源成分检测定性PCR法

Mungbean-derivedingredientsdetection—QualitativePCRmethod

2018-11-07发布2018-12-01实施天津市市场和质量监督管理委员会发布

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DB12/T843—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由天津市农村工作委员会提出并归口。

本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、浙江省农业科学院农产品质量标准研究所、天津市东丽区产品质量监督检验所。

本标准主要起草人：兰青阔、陈笑芸、王成、赵新、兰璞、王永、王庆平、汪小福、黄凤军、秦志扬。

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DB12/T843—2018

绿豆源成分检测定性PCR法

1范围

本标准规定了绿豆源成分的定性PCR检测方法的原理、试剂和材料、仪器、分析步骤、结果分析和表述、检出限。

本标准适用于绿豆源成分的定性PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

绿豆源成分特异性序列specificsequenceofMungbean-derivedingredients

本标准绿豆源成分特异性序列位于绿豆第5号染色体。

4原理

根据绿豆源特异性序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期的DNA片段，判断样品中是否含有绿豆源成分。

5试剂和材料

5.1除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的一级水。

5.21mol/L氢氧化钠溶液：在160mL水中加入8.0g氢氧化钠(NaOH),溶解后，冷却至室温，再

加水定容到200mL。

5.3CTAB-Abuffer:将4g十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)、16.4g氯化钠(NaC1)、3.15g三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HC1)、1.5g乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)依次加入到100mL无菌去离子水中，用1mol/L氢氧化钠溶液(见5.1)调pH至8.0,加水定容至200mL。在103.4kPa(121℃)

条件下灭菌15min。

5.4CTAB-Bbuffer:将1g十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)、0.5g氯化钠(NaCl)、依次加入到100

mL无菌去离子水中，用1mol/L氢氧化钠溶液(见5.1)调pH至8.0,加水定容至200mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌15min。

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DB12/T843—2018

5.51.2mmol/LNaCl溶液：将7g氯化钠(NaC1)溶于100mL无菌去离子水中。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌15min。

5.670%乙醇：将737mL95%乙醇，加水定容至1000mL。

5.7500mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液(pH8.0):称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，

加入70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液(见5.1)直至EDTA-Na2完全溶解，用氢氧化钠溶液(见5.1)调pH至8.0,加水定容至100mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

5.81mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HC1)溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷溶解于800mL水中，用盐酸调pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌

20min。

5.9TE缓冲液(pH8.0):分别量取10mL三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液(见5.7)和2mL乙二胺四乙酸二钠溶液(见5.6),加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

5.10琼脂糖。

5.1110g/L溴化乙锭(EB)溶液：称取1.0g溴化乙锭，溶解于100mL水中，避光保存。溴化乙锭有致癌