军医大学免疫教程二：基因工程Ig.pptVIP

(三)单区抗体(singledomainantibody)及

最小识别单位(minimalrecognitionunit，MRU)单区抗体是抗体分子中单独具有结合抗原能力的重链可变区(VH)，MRU是来自CDR的短肽，可模拟亲本抗体的抗原结合活性FvScFv单区抗体单区抗体的优越性：穿透力强，有利于实际应用；不需将VH和VL基因分别克隆和进行正确配对，制备时操作简便；只有VH而不需与VL相互作用，稳定性较Fv和ScFv更好；其抗原结合部位的构象较为特殊，VH抗体CDR襻插入抗原表面的凹陷中，这对于制备酶抑制性抗体有重要意义。MRU的优越性：穿透能力强，半寿期短，显像时本底低，适用于临床显像诊断。化学交联法易引起抗体分子的抗原结合部位的结构改变，降低抗体的活性。DTNB、O-PDM使2个ScFv在体外相连接，形成双价小分子抗体。三、双价和多价小分子抗体(二)二聚化结构域融合法在单价小分子抗体的3’端连接具有二聚化倾向的结构域(dimerizationdomain)亮氨酸拉链(leucinezipper)a螺旋束(helixbundle)Ig的CH3区链亲和素双链抗体(diabody)将ScFv的接头缩短，使两个ScFv分子间的VH和VL配对，发生非共价键结合，形成双价小分子抗体。构建时操作简单，具有良好的性能和应用前景。三链抗体(triabody)四链抗体(tetrabody)(三)接头长度控制法双链抗体三链抗体四链抗体四、双特异性抗体

(bispecificantibody,BsAb)化学偶联方法SPDP、DTNB、O-PDM等化学交联剂可将两个不同抗原特异性的全抗体分子或其功能性片段连接成BsAb。化学偶联方法：?简便快速，产物容易纯化?易造成抗体分子的抗原结合部位发生改变，从而降低其活性?交联剂的致畸和致癌作用?主要用于体外的实验研究。四源杂交瘤(quadroma)：使两株各自分泌不同特异性单抗的杂交瘤细胞再融合三源杂交瘤(trioma)：用一株杂交瘤细胞与免疫后的脾细胞融合杂交-杂交瘤方法

(hybrid-hybridoma)由于两套重链和轻链之间可重新随机组合，而目的BsAb仅占20％左右，所以必须从大量相似的Ig中费时费力地筛选出目的BsAb；多倍体杂交瘤的稳定性差，必须经常对杂交瘤进行克隆；分泌抗体的量少，且活性低，增加纯化难度；人源杂交瘤技术存在诸多问题，鼠源性BsAb用于人体会出现HAMA，故应用受到限制。杂交-杂交瘤方法的主要缺点：STEP3STEP2STEP1主要是以Fab、Fv和ScFv等抗体分子片断为基本构件，用基因工程方法制备BsAb。末端半胱氨酸残基(Cys)共价交联在两种不同ScFv或带铰链区的Fab段的羧基端分别接上半胱氨酸残基(SerCys或Gly4Cys)(三)基因工程方法2.链间连接肽相连单链双特异性抗体(single-chainbispecificantibody,scBsAb)在DNA水平用一个柔性较强、长度合适的肽段将两个ScFv首尾相接，常用的是Gly4Ser，而长肽链可用(Gly4Ser)3，形成双ScFv的单肽链，经过正确折叠成为BsAb。二聚化结构域融合法4.构建双特异性双链抗体(bispecificdiabody)将抗体A的VH和抗体B的VL用一短的接头连接成一条杂合ScFv，同理将抗体A的VL和抗体B的VH连接成另一条杂合ScFv，构建含有这两条链的双顺反子表达载体，当两者同时表达时，由于短接头的限制，使两个不同特异性抗体的轻链可变区和重链可变区交叉组合。BAAB含Fv段的抗体融合蛋白免疫靶向性抗体融合蛋白将毒素、酶、细胞因子等生物活性蛋白与含Fv段的针对肿瘤的抗体片段融合，应用于靶向治疗恶性肿瘤。五、抗体融合蛋白1重组免疫毒素(immunotoxin)2抗体分子与毒性蛋白的偶联物5蓖麻毒素、肥皂草素及商陆抗病毒蛋白4假单胞菌外毒素和白喉毒素植物来源的毒素3常用毒素：细菌来源的毒素毒素的细胞毒性作用使得所构建的免疫毒素不能在真核细胞表达，而用大肠杆菌进行表达制备。植物毒素难于在原核细胞中表达，故很少用