基因工程的原理和技术.pptVIP

一.基因工程的基本操作步骤（技术）(一)获得目的基因生物材料DNA提取限制酶DNA片段形成重组DNA分子导入受体菌群体构建基因组文库mRNA反转录目的基因(cDNA)形成重组DNA分子导入受体菌群体构建cDNA文库目的基因的核苷酸序列是已知化学合成法3.利用PCR技术扩增目的基因1.从基因文库中获取2.化学合成法提取获取大量目的基因或可推测的最快第几轮能得到目的基因？第二个循环第一个循环第三个循环DNA分子目的基因解旋酶高温（加热至95℃）RNA引物DNA引物解旋酶、DNA聚合酶等TaqDNA聚合酶人工基因合成法DNA合成仪PCR扩增仪0102获得目的基因问题：怎样将目的基因与质粒进行重组？一.基因工程的基本操作步骤（技术）质粒目的基因限制酶DNA连接酶重组DNA同一种限制酶切割外源基因DNA连接酶质粒重组DNA分子（重组质粒）12345问题2：形成的重组质粒导入受体细胞后，除了能够稳定存在外，并且可以遗传给下一代。同时，使目的基因在受体细胞中表达和发挥作用，需要对重组质粒作怎样的修饰？据图回答：一个表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有哪些基本元件？一.基因工程的基本操作步骤（技术）(二)形成重组DNA分子（构建基因表达载体)基因表达载体的组成启动子目的基因终止子复制起点标记基因(一)获得目的基因通常用同一种限制酶切割目的基因和载体(质粒)，形成相同的粘性末端，再用DNA连接酶将二者连接,形成重组DNA分子（基因表达载体）。用BamHⅠ对胰岛素基因和质粒切割，加入DNA连接酶，得到的都是重组质粒吗？含目的基因的DNA片段载体BamHⅠBamHⅠDNA连接酶重组体载体自连目的基因自连双酶切连接：思考：如何避免质粒和目的基因的自身环化？避免载体和目的基因的自身环化、载体和目的基因间反向连接提高重组DNA分子的重组率12形成重组DNA分子（构建基因表达载体)1获得目的基因2将目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。3一.基因工程的基本操作步骤（技术）如果是导入微生物（如细菌）重组质粒大肠杆菌的拟核目的基因氨苄青霉素抗性基因（标记基因）将细菌用CaCl2处理，使细胞处于感受态，可促进细胞吸收DNA分子如果是导入微生物（如细菌）感受态：细胞处于容易吸收外源性DNA的状态。处于感受态的细胞称为感受态细胞.1CaCl220℃3重组载体4感受态细胞542℃6一.基因工程的基本操作步骤（技术）(三)目的基因导入受体细胞1.转基因微生物重组DNA分子(基因表达载体)CaCl2处理感受态细菌细胞(工程菌)目的基因随受体细胞的繁殖而复制增大细胞壁通透性(二)形成重组DNA分子（构建基因表达载体)(一)获得目的基因吸收DNA分子重组DNA进入细菌细胞如果是导入动物细胞显微注射仪受精卵思考：培育转基因动物时，受体细胞能否采用动物体细胞？试说明理由。一般可以采用动物的什么细胞？用口径为1μm的DNA注射器，将大量的目的基因片段注入到受精卵的核内，然后把经过注射的受精卵移植到另一只雌性动物的子宫内，使受精卵发育为转基因动物。1234(一)获得目的基因(三)目的基因导入受体细胞1.转基因微生物重组DNA分子(基因表达载体)CaCl2处理感受态细菌细胞(工程菌)目的基因随受体细胞的繁殖而复制增大细胞壁透性2.转基因动物重组DNA分子显微注射受精卵或早期胚胎细胞(整合到染色体DNA上)转基因动物动物细胞培养胚胎移植(二)形成重组DNA分子（构建基因表达载体)一.基因工程的基本操作步骤（技术）吸收DNA分子重组DNA进入细菌细胞或病毒侵染AB如果是导入植物细胞，最好以什么细胞为受体细胞？一般采用的运载体又是什么？比如：培育抗虫棉，怎样操作才能成功导入？思考：农杆菌转化法农杆菌的Ti质粒T-DNA：(可转移的DNA）可转移（也可以将目的基因转移）至受体细胞中，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。农杆菌转化法3.转基因植物植物体细胞(整合到细胞染色体DNA上)植物组织培养农杆菌转化法农杆菌转基因植物重组DNA分子侵染基因枪01利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒（有钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um）表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。02这是单子叶植物中