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乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

对流免疫电泳实验报告

【篇一：实验十一免疫电泳】

免疫电泳技术

抗原与抗体的结合在沉淀反应中，呈一定的分子比例。不同抗原和

抗体之间的分子比例是不同的，但只有在分子比例合适时，才出现

可见的沉淀。所以沉淀能否出现并不完全反映抗原和抗体是否存在

和发生结合。抗原结合多个抗体分子，称抗原为多价；抗体一般只

能结合两个抗原分子（igm类抗体分子通常可以结合5个抗原分子）

的抗原决定法簇，故为二价。只有在彼此的结合价饱和时，才出现

大量的抗原-抗体复合物沉淀。

当抗原与抗体的比例合适时，即二者结合价彼此饱和，就可形成网

状结构的大分子抗原-抗体复合物沉淀，称为等价带。若比例不合适

时，抗体或抗原过量，则虽有抗原、抗体的结合，但不能大量形成

网状结构的大分子复合物，沉淀量很少，甚至不出现沉淀。在抗原、

抗体数量关系曲线中，抗体过剩区域称为抗体过剩带，抗原过剩区

域称为抗原过剩带。如图1所示，在等价带的反应液中加入过量的

抗原或抗体，沉淀复合物就会有部分溶解，甚至全部溶解的现象。

这是由于新加入的抗原或抗体竞争地结合相应的抗体或抗原，使网

状大分子结构破坏，形成小分子复合物，致使沉淀出现溶解，沉淀

量减少甚至完全消失。在沉淀反应中，由于抗原过量而不出现沉淀

的现象，称为前带现象。此时不能误认为无沉淀就是无抗原存在，

为了检测就必须稀释抗原。抗体过量时，称为后带现象，同理需要

稀释抗体进行检测。

图1的位置

抗原与抗体的结合是依赖于两者分子结构的互补性，故其特异性高。

这种结合也是相当稳定的。在一定条件下（过酸、过碱或浓盐存在

下），二者可以分开，即结合是可逆的。解离后的抗原、抗体的活

性一般保持不变。

双向免疫扩散测定法

原理

双向扩散法(doublediffusion)又称琼脂扩散法，是利用琼脂凝胶为

介质的一种沉淀反应。琼脂或琼脂糖凝胶是多孔的网状结构，大分

子物质可以自由通过，这种分子的扩散作用可使

乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。——《孟子》

分别处于两处的抗原和相应的抗体通过扩散相遇，形成抗原-抗体复

合物，比例合适时出现沉淀。由于凝胶透明度高，可直接观察到复

合物的沉淀线（弧）。沉淀线（弧）的特征与位置取决于抗原相对

分子质量的大小，分子结构、扩散系数和浓度等因素。当抗原、抗

体存在多种系统时，会出现多种沉淀线（弧）。依据沉淀线（弧）

可以定性抗原，诊断疾病。此法操作简单，灵敏度高，是最为常用

的免疫学测定抗原和抗血清效价的方法。

操作方法

（一）制备离子琼脂板

用10ml量筒，量取4ml融化的巴比妥离子琼脂，倒在玻璃片上，

待琼脂凝固后，按图2所示的方法打孔。

图2的位置

打空后用注射器针头将孔内琼脂挑出，在酒精灯上烘烤背面，使琼

脂与玻璃板贴紧。

（二）稀释抗原和抗体

采用2倍连续稀释法。将抗原与抗体按2的等比级数即20、21、22、

23?方式连续稀释。方法是取试管数支，各加入稀释液（生理盐水）

一份，在于第一管中加入抗原或抗体一份，用吹吸法混匀后，吸出

一份加入第二管中,如此依次稀释到最后一管。其稀释倍数依次是：2，

4，8?。

（三）加样

将稀释好的抗原或抗体依次加入外周孔中，中心孔加入相应的抗体

或抗原，加入的量以平琼脂表面为度或用微量进样器定量加入。加

样后置大培养皿内（皿内放有湿滤纸或湿纱布以维持湿度）。盖好

皿盖，于24—37℃温箱内保温24—48小时。扩散后可出现清晰的

沉淀线，以出现沉淀线的抗体