蛋白质精氨酸甲基转移酶PRMT5调控类甜蛋白基因TLP可变剪切影响灵芝对绿色木霉耐受性的机制研究.pdfVIP

本论文研究内容

由现代农业产业技术体系建设专项资金资助

（）

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ChinaAgricultureResearchSystem（CARS-20）

特此致谢

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目录

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摘要I

ABSTRACTIII

符号和缩略语说明VI

第一章文献综述1

1灵芝及灵芝活性成分的研究概况1

1.1灵芝的分类地位1

1.2灵芝的药用价值1

1.3灵芝几丁质的研究进展1

2组蛋白精氨酸甲基转移酶PRMT5的研究进展3

2.1可变剪接的研究进展3

2.2PRMT5的甲基化修饰5

3TLP的研究进展6

4本文的研究内容和研究意义8

4.1本研究的意义8

4.2本研究的主要内容8

第二章PRMT5影响TLP的可变剪切调控灵芝对绿色木霉的耐受性9

前言9

1实验材料10

1.1菌株和主要试剂10

1.2主要仪器10

2实验方法10

2.1菌株培养条件10

2.2灵芝总RNA的提取与cDNA的制备11

2.3灵芝TLP基因的克隆及测序11

2.4生物信息学分析14

2.5灵芝TLP基因沉默转化子的获得14

2.6灵芝TLP基因过表达转化子的获得15

2.7灵芝共沉默转化子的获得17

2.8荧光定量PCR（qRT-PCR）17

3结果与分析18

3.1沉默PRMT5增加了灵芝对绿色木霉的抗性18

3.2灵芝PRMT5调控TLP的可变剪切18

3.3TLP的功能域分析20

i

蛋白质精氨酸甲基转移酶PRMT5调控类甜蛋白基因TLP可变剪切影响灵芝对绿色木霉耐受性的机制研究

3.4TLP沉默菌株筛选20

3.5TLP过表达菌株筛选21

3.6TLP可变剪切影响灵芝对绿色木霉的耐受性22

3.7灵芝共沉默菌株筛选23

3.8灵芝PRMT5通过调控TLP可变剪切影响灵芝对绿色木霉的耐受性24

4讨论24

第三章PRMT5调控TLP与PGI互作影响灵芝对绿色木霉的耐受性27

前言27

1实验材料28

1.1菌株及试剂28

1.2主要仪器28

2实验方法28

2.1菌株培养条件28

2.2酵母双杂交技术28

2.3双分子荧光互补实验30

2.4原核表达和纯化30

2.5表面等离子共振系统互作分析实验32

2.6灵芝PGI酶活测定32

2.7灵芝几丁质含量的测定32

3结果与分析34

3.1酵母双杂交实验验证TLP