仪器分析第四章高效液相色谱分析法.pptVIP

第二节主要分离类型三、离子交换色谱固定相：阴离子交换树脂或阳离子交换树脂。阳离子：－SO3H(强)－CO2H(弱)阴离子：－N+R3(强)－NH2(弱)担体苯乙烯-二乙烯苯共聚物微球键合基团键合阳离子交换树脂固定相，采用酸性水溶液；阴离子交换树脂固定相，采用碱性水溶液。流动相：试样组分在固定相上发生的反复离子交换反应，依据组分与离子交换剂之间亲和力的不同而分离。基本原理：第二节主要分离类型第二节主要分离类型R—A+B=R—B+A01阴离子交换：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-03阳离子交换：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+02试样组分与交换基团间的作用力的大小决定色谱的保留行为。04一般形式：阳离子交换：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+1阴离子交换：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-2组分与离子交换剂之间作用力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。作用大，保留时间长。3应用：离子及可离解的化合物，4氨基酸、核酸、蛋白质等。5第二节主要分离类型01离子对色谱:用正向或反向色谱柱分离离子和中性化合物混合物的方法。???离子对：两个相反电荷的离子相互作用形成一个中性化合物。0203第二节主要分离类型四、离子对色谱第二节主要分离类型原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相（固定相）中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配。01由于待测离子的性质不同，与对离子形成离子对的能力不同，形成的离子对的疏水能力不同，在两相间的分配系数不同，从而实现色谱分离。02阴离子分离：烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子。阳离子分离：烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子。第二节主要分离类型原理：利用凝胶中孔径大小的不同，按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。01快速分离不同分子量混合物的色谱方法。02第二节主要分离类型五、空间排阻色谱---凝胶色谱第二节主要分离类型相对分子质量差别大于10％的化合物才可以分离排阻色谱分离示意图第二节主要分离类型酶、抗原等亲和色谱原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特性亲和力，进行选择性分离的一种色谱方法。具有反应活性的连接链（环氧、联胺等）第三节液相色谱的固定相与流动相固定相流动相生物与化学工程学院仪器分析生物与化学工程学院仪器分析生物与化学工程学院仪器分析第四章高效液相色谱分析法第一节高效液相色谱仪美国安捷伦公司Agilent1200第一节高效液相色谱仪美国戴安公司UltiMate3000第一节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪结构流程二、高压输液系统三、梯度淋洗装置六、液相色谱检测器五、分离系统四、进样系统第一节高效液相色谱仪储液瓶高压泵进样器色谱柱检测器废液一、高效液相色谱仪结构流程高压输液泵、高效分离住、高灵敏度检测器第一节高效液相色谱仪”高压输液系统（高压泵）要求：输出压力高；平稳、脉冲小；流量稳定可调；耐腐蚀。机械往复柱塞泵结构图第一节高效液相色谱仪梯度淋洗装置在液相色谱中,可以通过改变流动相的组成、极性来改善分离和调节出峰时间。两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定比例送入混合器，混合后进入色谱柱。高压梯度(外梯度)一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入混合器中混合。低压梯度(内梯度)第一节高效液相色谱仪第一节高效液相色谱仪通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改变分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。梯度洗脱梯度洗脱的特点?改善分离,加快分析速度；?改善峰形,减少拖尾;?可能引起基线漂移。第一节高效液相色谱仪六通阀进样装置进样系统第一节高效液相色谱仪五、分离系统（色谱柱）内径：1～6mm，柱长：5～50cm；柱填料粒径：5～10μm为保护色谱柱，通常在柱前加一支填料与色谱柱相同的保护柱。类型示差折光检测器荧光检测器电化学检测器电导检测器液相色谱检测器紫外检测器第一节高效液相色谱仪第一节高效液相色谱仪紫外检测器—应用最广泛的检测器