2025年新课标高考生物习题检测及真题解析试卷6.专题二十六 基因工程与DNA的粗提取（带答案解析）.docx

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应用创新题组A

应用生物技术的研究与应用

1.(2024届北京101中学月考一,15科研情境)OsGLO1、EcCAT、EcGCL和TSR四个基因分别编码四种不同的酶,研究人员将这些基因分别与叶绿体转运肽(引导合成的蛋白质进入叶绿体)基因连接,构建多基因表达载体(载体中部分序列如图所示),利用农杆菌转化法转化水稻,在水稻叶绿体内构建了一条新代谢途径,提高了水稻的产量。下列叙述正确的是()

A.可用抗原—抗体杂交技术检测四种酶在转基因水稻中的表达量

B.四个基因转录时都以DNA的同一条单链为模板

C.应选用含卡那霉素的培养基筛选被农杆菌转化的水稻细胞

D.四个基因都在水稻叶绿体内进行转录和翻译

答案A由题图可知,OsGLO1启动子启动转录的方向与其他的不同,所以四个基因转录时的模板不是同一条DNA单链,B错误;卡那霉素抗性基因不位于T-DNA中,而潮霉素抗性基因位于T-DNA中,应选用含潮霉素的培养基筛选被农杆菌转化的水稻细胞,C错误;利用农杆菌转化法转化水稻,可使目的基因插入水稻细胞中的染色体DNA上,与叶绿体转运肽基因连接的四个基因可在水稻细胞核内进行转录,在核糖体中进行翻译,D错误。

2.(2024广东,22,12分科研情境)非细胞合成技术是一种运用合成生物学方法,在细胞外构建多酶催化体系,获得目标产物的新技术,其核心是各种酶基因的挖掘、表达等。中国科学家设计了4步酶促反应的非细胞合成路线(如图),可直接用淀粉生产肌醇(重要的医药食品原料),以期解决高温强酸水解方法造成的严重污染问题,并可以提高产率。

回答下列问题:

(1)研究人员采用PCR技术从土壤微生物基因组中扩增得到目标酶基因。此外,获得酶基因的方法还有。(答出两种即可)?

(2)高质量的DNA模板是成功扩增出目的基因的前提条件之一。在制备高质量DNA模板时必须除去蛋白,方法有。(答出两种即可)?

(3)研究人员使用大肠杆菌BL21作为受体细胞、pET20b为表达载体分别进行4种酶的表达。表达载体转化大肠杆菌时,首先应制备细胞。为了检测目的基因是否成功表达出酶蛋白,需要采用的方法有。?

(4)依图中所示流程,在一定的温度、pH等条件下,将4种酶与可溶性淀粉溶液混合组成一个反应体系。若这些酶最适反应条件不同,可能导致的结果是。在分子水平上,可以通过改变,从而改变蛋白质的结构,实现对酶特性的改造和优化。?

答案(1)从基因文库中获取、用化学方法人工合成

(2)蛋白酶水解法、盐析法、高温变性法

(3)感受态抗原—抗体杂交

(4)部分酶失活,无法获得肌醇基因结构

解析(2)制备高质量DNA模板时,可直接在滤液中加入蛋白酶分解蛋白质,而不破坏DNA。中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,当盐浓度较高时,蛋白质的溶解度下降并析出,这种现象称为盐析。利用DNA对高温的耐受性,严格控制温度范围,使蛋白质变性沉淀而DNA分子不发生变性,可将DNA与蛋白质分离。(3)将表达载体导入大肠杆菌细胞最常用的转化方法是首先用Ca2+处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞。然后将重组DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。为了检测目的基因是否表达出酶蛋白,可以从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原—抗体杂交,若有杂交带出现,表明目的基因已表达出蛋白质产品。(4)酶的作用条件较温和,不同酶的最适温度、最适pH一般不同,将4种酶放在同一体系中,控制温度、pH等条件一致,则部分酶可能会因温度或者pH不适宜而失活,不能获得肌醇。基因指导蛋白质的合成,可以通过改造酶基因的结构,从而改变蛋白质的结构,进而实现对酶特性的改造和优化。

3.(2024山东,25,11分科研情境)水稻胚乳中含直链淀粉和支链淀粉,直链淀粉所占比例越小糯性越强。科研人员将能表达出基因编辑系统的DNA序列转入水稻,实现了对直链淀粉合成酶基因(Wx基因)启动子序列的定点编辑,从而获得了3个突变品系。

(1)将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti质粒构建重组载体时,所需的酶是,重组载体进入水稻细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程称为。?

(2)根据启动子的作用推测,Wx基因启动子序列的改变影响了,从而改变了Wx基因的转录水平。与野生型水稻相比,3个突变品系中Wx基因控制合成的直链淀粉合成酶的氨基酸序列(填:“发生”或“不发生”)改变,原因是。?

(3)为检测启动子变化对Wx基因