上海大学-生物工艺学第7章--谷氨酸发酵.ppt

***4.诱导酶合成调节基因位点突变,不能编码调节蛋白；添加底物结构类似物,使其与调节蛋白结合；不断降低阻遏物的浓度(如连续发酵)；发酵过程参数测定还原糖的测定谷氨酸的测定菌体形态观察菌体浓度测定发酵过程参数的控制DO值pH温度搅拌速度发酵发酵液冷却接种三角瓶培养固体斜面培养上罐实消培养基的配制谷氨酸发酵的工艺流程图谷氨酸发酵液常温等电法等电结晶沉降分离脱色中和结晶冷冻等电法上清液（母液）离子交换谷氨酸晶体谷氨酸晶体冷冻结晶浓缩结晶谷氨酸钠晶体（味精）谷氨酸的分离与味精的制备（四）??发酵生产工艺?

??1.培养基成分碳源：实际生产中以糖质原料为主。培养基中糖浓度对谷氨酸发酵有密切的关系。在一定的范围内，谷氨酸产量随糖浓度的增加而增加。氮源：氮源是合成菌体蛋白质、核酸及谷氨酸的原料。大约85%的氮源被用于合成谷氨酸，另外15%用于合成菌体。碳氮比对谷氨酸发酵有很大影响。一般发酵工业碳氮比为100：0.2~2.0，谷氨酸发酵的碳氮比为100：15~21。无机盐：是微生物维持生命活动不可缺少的物质。主要功能：构成细胞的组成成分；作为酶的组成成分；激活或抑制酶的活力；调节培养基的渗透压；调节培养基的pH；调节培养基的氧化还原电位。起着调节微生物生命活动的作用。发酵时，使用的无机离子有K+、Mg2+、Fe2+、Mn2+等阳离子和PO43-、SO42-、Cl－等阴离子，其用量如下：???????????KH2PO4??0.05%~0.2%?

???????????K2HPO4??0.05%~0.2%?

???????????MgSO4.7H2O?0.005%~0.1%?

???????????FeSO4.7H2O??0.0005%~0.01%?

???????????MnSO4.4H2O?0.0005%~0.005%生物素：又叫维生素H或辅酶R。生物素的作用是影响代谢途径；影响细胞的渗透性。谷氨酸产生菌几乎都是生物素缺陷型，实际生产中通过添加玉米浆、麸皮水解液、糖蜜等作为生长因子（生物素）的来源。2.培养基?

（1）斜面培养基?葡萄糖?0.1%、牛肉膏?1.0%、?蛋白胨?1.0%、氯化钠?0.5%、琼脂?2.0%、pH?7.0~7.2121℃灭菌30min(传代和保藏斜面不加葡萄糖)。（2）?一级种子、二级种子及发酵培养基?一级种子：葡萄糖?2.5%、尿素?0.6%、KH2PO4?0.1%、MgSO4.7H2O?0.04%、玉米浆?2.3~3.0ml、pH?7.0；二级种子：水解糖?3.0%、尿素?0.6%、玉米浆?0.5~0.6ml、K2HPO4?0.1~0.2%、MgSO4.7H2O?0.04%、pH?7.0；发酵培养基：水解糖12~14%、尿素?0.5~0.8%、玉米浆?0.6ml、MgSO4.7H2O?0.06%、KCl?0.05%、Na2HPO4??0.17%、pH?7.0?。3.发酵条件的控制?

（1）温度谷氨酸发酵前期(0~12h)是菌体大量繁殖阶段，在此阶段菌体利用培养基中的营养物质来合成核酸、蛋白质等，供菌体繁殖用，而控制这些合成反应的最适温度均在30~32℃。在发酵中、后期，是谷氨酸大量积累的阶段，而催化谷氨酸合成的谷氨酸脱氢酶的最适温度在32~36℃，故发酵中、后期适当提高罐温对积累谷氨酸有利。（2）pH值发酵液的pH影响微生物的生长和代谢途径。发酵前期如果pH偏低，则菌体生长旺盛，长菌而不产酸；如果pH偏高，则菌体生长缓慢，发酵时间拉长。在发酵前期将pH值控制在7.5~8.0左右较为合适，而在发酵中、后期将pH值控制在7.0~7.6左右对提高谷氨酸产量有利。（3）通风在谷氨酸发酵过程中，发酵前期以低通风量为宜；发酵中、后期以高通风量为宜。实际生产上，以气体转子流量计来检查通气量，即以每分钟单位体积的通气量表示通风强度。另外发酵罐大小不同，所需搅拌转速与通风量也不同。（4）泡沫的控制消泡方法：机械消泡(耙式、离心式、刮板式、蝶式消泡器)，化学消泡(天然油脂、聚酯类、醇类、硅酮等)。（5）发酵时间不同的谷氨酸产生菌对糖的浓度要求也不一样，其发酵时间也有所差异。低糖(10%~12%)发酵，其发酵时间为36~38h，中糖(14%)发酵，其发酵时间为45h。发酵过程中各种参数的变化情况如图所示。最后的发酵液中谷氨酸的浓度很