第八章酶免疫技术ppt课件.pptxVIP

《免疫学检验》;第一节酶免疫技术的原理

第二节酶免疫技术的分类

第三节酶联免疫吸附试验

第四节固相酶免疫测定的技术要点

第五节酶免疫组织化学技术

第六节其他酶免疫技术

第七节酶免疫测定的应用;

第一节酶免疫技术的原理

;主要试剂:

酶标记的抗体或抗原

酶标物特点：

免疫学活性

酶对底物的催化活性;特点：

灵敏度高、特异性强、准确性好

酶标记试剂能够较长时间保持稳定

操作简便、对环境没有污染。

易与其它技术偶联

衍生出适用范围更广的新方法。;

第二节酶免疫技术分类

;最具代表性的两种技术;EMIT示意图;CEDIA示意图;分类：液相酶免疫测定

固相酶免疫测定

以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（ELISA）是目前最为常用的固相酶免疫测定;

第三节酶联免疫吸附试验

;三个部分：

免疫反应

酶与底物反应

检测方法的建立;;固相的抗原或抗体;双抗体夹心法（doubleantibodysandwich-ELISA）

方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色

应用：

二价或二价以上的较大分子抗原测定(乙型肝炎表面抗原HBsAg),不能用于半抗原等小分子的测定。;;;ELISA检测抗体的方法;;;一、试剂的准备;一、试剂的准备;辣根过氧化物酶（HRP）;HRP的底物;HRP的常见底物;OPD反应后显橙黄色，加酸终止反应后呈棕黄色，测定波长492nm。不稳定，致癌性。;

碱性磷酸酶（ALP）

;ALP的

底物;二、酶标记抗体或抗原的方法;抗原要求纯度高，抗原性完整;制备方法;戊二醛交联法;纯化;;四、最适工作浓度的选择(棋盘法);五、测定方法的标准化;;;;;;;;;;

第五节酶免疫组织化学技术

;酶免疫组织化学技术(enzymeimmunohistochemistrytechnique);;;;免疫印记法（immunoblottingtest）;生物素-亲和素（BSA）-酶联免疫吸附试验

生物素（biotin）-亲和素（avidin）

亲和素与生物素之间的亲和力极强，比抗原与抗体的亲和力至少高1万倍，且具有高度特异性和稳定性。;;ELISA在预防医学、临床医学的应用

病原体及其抗体的检测（乙肝两对半）

蛋白质的检测

非??类激素的检测

药物的检测

尿中毒品的检测;ELISA在食品检测中的应用

食品中微生物的检测

食品毒素的检测（黄曲霉毒素）

食品中残留农药的检测（除草剂、杀菌剂和杀虫剂）

食品中残留抗生素的检测（氯霉素、磺胺类、呋喃类、喹诺酮类）;ELISA在转基因食品检测中的应用（PCR-ELISA方法）

DNA检测

蛋白质检测

;1．酶免疫技术的要点？

2．酶联免疫吸附试验的原理（ELISA）？

3．竞争法在酶联免疫检测应用中的原理和应用？

4．常用的底物有哪几类？特点？

5．常用的酶有哪几类？特点？

6．何谓包被与封闭？其作用？

7．对酶免疫技术的应用评价如何？;酶免疫技术是标记免疫技术的一种，它是以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂的免疫检测方法，在抗原与抗体的特异性反应完成后，通过酶对底物的作用进一步提高敏感性。酶免疫技术可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定两大类,后者根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离的酶标记物而分为均相和非均相两种类型。

均相酶免疫测定主要用于小分子物质和半抗原的测定，非均相酶免疫测定根据是否使用固相支持物，又可分为液相和固相酶免疫测定两种类型。最常用的是以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（ELISA）,其原理可以有夹心法、竞争法、间接法和捕获法等。