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第十一单元现代生物科技专题
专题二十六基因工程与DNA的粗提取
基础篇固本夯基
考点一基因工程的基本工具与基本操作程序
1.(2024届河南大联考,38)脱水素(DHN)是植物细胞中一种与抗涝害能力密切相关的蛋白质,由DHN基因编码。研究人员将牡丹的DHN基因转移至拟南芥中,以研究脱水素对植物抗涝性能的影响。请回答下列问题:
(1)从牡丹叶片细胞中提取总RNA,以此为模板进行逆转录,获得文库,此类基因文库和基因组文库中的基因在结构上的主要区别是。?
(2)利用PCR技术对目的基因进行扩增,扩增的前提是需要利用一段,以便合成引物。以1个目的基因片段为模板进行扩增,经过5次循环后,消耗的引物数量为。?
(3)将获得的基因插入质粒,构建基因表达载体,其目的是使目的基因,并可以遗传给下一代;基因表达载体中还要有标记基因,标记基因的作用是。?
(4)用花粉管通道法将目的基因转入拟南芥,此方法中,基因表达载体借助进入受体细胞;为观察转基因拟南芥的抗涝能力,需要将植株进行涝害处理,观察其生理状态的变化。?
答案(1)cDNAcDNA文库中的基因不含启动子、终止子(或不含非编码/内含子序列)(2)已知目的基因(DHN基因)的核苷酸序列62(3)在受体细胞中稳定存在鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来(4)花粉管通道转基因拟南芥和野生型拟南芥(非转基因拟南芥)
2.(2024届银川一中月考,38)人类在预防与诊疗传染性疾病的过程中,经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒,该病毒表面的A蛋白为主要抗原,其抗体制备的流程如图,请回答:
(1)过程①代表的是。在基因工程中,如果A基因的数量太少,常采用技术,该技术在进行互补链合成时常用酶。过程③采用的实验技术是,获得的X是。?
(2)对该传染病疑似患者诊断时,可用图中的进行特异性结合检测。?
(3)在A基因表达载体中,必须含有,便于检测目的基因是否导入受体细胞;目的基因的首端必须含有启动子,它是的识别和结合位点,以使目的基因得以表达。?
答案(1)逆(反)转录PCR热稳定DNA聚合(Taq)细胞融合杂交瘤细胞(2)抗A蛋白的单克隆抗体(3)标记基因RNA聚合酶
3.(2024届甘肃天水一中阶段考,33)根据基因工程的有关知识,回答下列问题:
(1)基因工程的核心步骤是。将目的基因导入植物受体细胞最常用的方法为。?
(2)在基因工程的操作过程中需要用到两种工具酶——。其中某种酶切割DNA分子后可产生末端和末端。?
(3)质粒用EcoRⅠ切割后产生的片段如图:AATTC……G
G……CTTAA为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性核酸内切酶切割,该酶必须具有的特点是。?
(4)基因工程中目的基因导入受体细胞后进行检测鉴定,若要检测目的基因是否在受体细胞中成功表达,其方法是。?
答案(1)基因表达载体的构建农杆菌转化法
(2)限制酶和DNA连接酶黏性平(顺序可颠倒)(3)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同(或碱基互补配对)(4)抗原—抗体杂交
4.(2024届陕西渭南一模,38)重组新冠病毒疫苗是基于新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)受体结合区(RBD)的天然结构特征疫苗,具有靶点明确、针对性强的特点。如图为通过基因工程的方法,在体外制备病毒的S蛋白的过程,请回答下列问题:
(1)目前,基因工程中使用的限制酶主要是从(填生物)中分离纯化获得的。含有限制酶的细胞通常还具有相应的甲基化酶,它可以对DNA的碱基序列进行修饰。含有某种限制酶的细菌可利用限制酶切割外源DNA,但不破坏自身DNA,其原因可能是①;②。?
(2)新冠病毒的遗传物质是RNA,要获得S基因,需要经过过程得到cDNA。需要用酶完成基因表达载体的构建。?
(3)要检测制备的S蛋白是否成功,可以采用法检测。要具体检测S蛋白的功效还需要进行的操作是。?
(4)研究人员想利用蛋白质工程的方法获得新S基因进而获得免疫效应更强的疫苗,请按照蛋白质工程的原理写出获得新S基因的基本途径:。?
答案(1)原核生物细菌自身的DNA分子没有该限制酶的识别序列甲基化酶对细菌自身的DNA分子进行了修饰,使限制酶无法识别(2)逆转录(或反转录)限制酶
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